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海参活性多糖的研究

朱玉强  
【摘要】: 海参(seacucumbers,holothurians)属于棘皮动物门(Echinodermata)海参纲(Holothurioidea),早在几百年前就被我国人民认定为佳肴和滋补营养品。近年来随着海洋生物多糖研究的迅速发展与空前活跃,人们发现海参多糖具有多种生物学功能,在细胞的生命活动中起到重要作用。 本文以刺参为原料,对实验用刺参进行了生物学鉴定;进行了刺参多糖的提取、精制及纯化;将所得纯化多糖对大鼠进行了30天喂养实验确证其对大鼠体重无明显影响,测定了LD_(50),并对其提高机体免疫力和抗肿瘤活性作用进行了研究。 1、实验用海参品种的鉴定 根据海参标本的体态特征,依据张玺等《中国经济动物志:环节(多毛纲)、棘皮、原索动物》一书,确定了实验用海参为刺参Stichopus japonicus Selenka 1867。 2、刺参中基本物质含量的测定 在营养成分方面刺参具有以下特点:蛋白质含量较高,干品达76.5%;脂肪含量较低,在1%左右;主要含有微量元素Na、Mg、K、P、Fe等。 3、刺参粗多糖的提取、精制与纯化工艺的确定 粗多糖提取采用蛋白酶解和乙醇沉淀技术。实验确定刺参多糖酶解提取的最佳温度为50℃,酶解时间为8小时,加酶量为50U/g刺参,加水量为3.5ml/g刺参。粗多糖干品的得率为冻煮刺参重的0.42%。 粗多糖精制采用活性炭脱色法去除粗多糖中的色素,通过醋酸钾液沉淀法去除粗多糖中的蛋白类杂质。精制多糖干品的得率为冻煮刺参重的0.15%。 多糖纯化用SepHadex G-150凝胶柱层析法,用自动部分收集器收集洗脱液。纯化多糖干品的得率为冻煮刺参重的0.09%。 刺参纯化多糖的茚三酮反应为阴性,表明不含蛋白质和氨基酸;琼脂糖电泳图中刺参多糖集中于比较狭窄的一条带,表明纯化多糖有较高的纯度;用浓盐酸水解纯化多糖后做纸层析,结果表明刺参多糖中含有岩藻糖、氨基半乳糖和葡萄糖醛酸。 纯化多糖中多糖含量为69.88%(以葡萄糖计);硫酸基与岩藻糖的含量分别为29.75%和11.68%。 4、急性毒理实验 1) 将刺参多糖经口灌胃喂养大鼠30天,结果表明各组动物体重、体重增加、进食量及 食物利用率与对照组相比均无显著性差异(P>0刀5):血红细胞计数、白细胞计数及脏器系 数与对照组相比均无显著性差异(P>0刀5);病理组织学检查无异常。 2)刺参多糖的LDS。大于10刀005g/kg上W,根据急性毒性分级,属实际无毒物质。 5、刺参多糖免疫调节功能评价 刺参多糖对小鼠脏器/体重比值无影响,能增强小鼠迟发型超敏反应(DTH)并提高单核 一巨噬细胞的碳廓清功能,表明刺参多糖能够增强细胞免疫调节作用和单核一吞噬细胞吞噬 功能。 6、刺参多糖抑制小鼠S;80肿瘤实验结果 通过灌胃刺参多糖研究其对小鼠 SI 80皮下实体瘤的抑制效果。同对照组及其它实验组相 比,刺参多糖具有很高的抑瘤率,达 79.540(其它几组分别为 96.43O、72.slo和 79.640): 在延长as。腹水瘤小鼠的生存时间方面,各实验组同对照组相比均没有显著性差异。


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