收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

盐地碱蓬SsNHX1基因的克隆及转基因拟南芥的培育

马秀灵  
【摘要】: 盐胁迫条件下,植物细胞渗透均衡和离子正常均衡状态被破坏,特别是胞质中过多的Na~+对植物细胞的代谢产生毒害,影响到植物细胞的调节机制。植物细胞为适应胁迫环境,具有一系列的适应机制,一方面积累可溶性物质;另一方面,尤其是盐生植物则通过Na~+外排或者Na~+区隔化和调整K~+/Na~+比率的机制来保持胞质内较低的Na~+浓度,以消除Na~+的毒害,此过程中,Na~+/H~+反向转运蛋白起到重要作用。 甜土植物拟南芥胞内控制离子区隔化基因AtNHX1及Na~+外排的基因SOS1均已克隆,并且AtNHX1在拟南芥中的过量表达显著提高了转基因植株的耐盐性,开创了降低Na~+毒害的基因操作新途径。真盐生植物盐地碱蓬基因SsNHX1对离子均衡所起的作用,通过SsNHX1基因在拟南芥中的过量表达,进行进一步的研究,对于植物细胞离子均衡研究具有重要意义。 本实验对盐地碱蓬SsNHX1基因进行了克隆(GenBank注册号AF370358)。由于Na~+/H~+反向转运蛋白基因已在拟南芥,水稻等植物中得到克隆。不同的Na~+/H~+反向转运蛋白基因具有保守区域,根据保守区段设计引物,扩增得到SsNHX1的部分片段,利用RACE方法得到其两端序列。由序列设计两端特异引物,RT-PCR扩增到SsNHX1全长cDNA,将其克隆并进行序列分析,结果与报导的其他物种中的Na~+/H~+反向转运蛋白序列具有较高的同源性。SsNHX1基因cDNA全长1665bp,编码一个分子量约61kD的蛋白。得到SsNHX1片段后,对其在碱蓬中的拷贝数及表达特性进行了分析,Southern结果表明SsNHX1在碱蓬中至少有3个拷贝,应是一个基因家族。Northern结果显示SsNHX1是受盐胁迫诱导的基因,特别是在叶中的表达更易受到盐诱导,这与其Na~+/H~+转运的功能相一致。将SsNHX1cDNA全长ORF克隆入表达载体pROK2中,导入根瘤农杆菌GV3101后,由渗透法进行拟南芥遗传转化,转基因植株经分子检测共得到23个独立转基因植株,PCR结果表明均有外源基因的插入,Southern结果进一步证明外源SsNHX1已整合到拟南芥染色体组中,并有单位点插入和多位点插入的区别。选择在Northern水平表达不同的两个独立株系进行进一步的生理测试。结果表明盐胁迫条件下转基因植株中Na~+含量明显高于野生型植株,盐耐受能力高于野生型植株,可能与Na~+区隔化能力的提高有关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 钱兵,顾克余,赫明涛,王志春;盐地碱蓬的生态生物学特性及栽培技术[J];中国野生植物资源;2000年06期
2 孙伟,李燕,赵彦修,张慧;盐地碱蓬延伸因子 (Ss EF-1α)的克隆与表达分析(英文)[J];西北植物学报;2004年09期
3 高健;盐地碱蓬中黄酮类物质的提取及抗氧化性研究[J];盐城工学院学报(自然科学版);2005年02期
4 张海燕,赵可夫;盐分和水分胁迫对盐地碱蓬幼苗渗透调节效应的研究[J];Acta Botanica Sinica;1998年01期
5 林学政,沈继红,刘克斋,黄晓航;种植盐地碱蓬修复滨海盐渍土效果的研究[J];海洋科学进展;2005年01期
6 段德玉,刘小京,李存桢,乔海龙;N素营养对NaCl胁迫下盐地碱蓬幼苗生长及渗透调节物质变化的影响[J];草业学报;2005年01期
7 宋百敏,宗美娟,刘月良;碱蓬和盐地碱蓬花粉形态研究及其在分类上的贡献[J];山东林业科技;2002年02期
8 房淑珍 ,李淑祥;加强藜科野生油脂植物的开发利用[J];海洋信息;1996年02期
9 邵红梅,孙书芹,徐红娟;高效液相色谱法测定盐地碱蓬汁中7种水溶性维生素和18种氨基酸[J];色谱;1996年03期
10 綦翠华,韩宁,王宝山;不同盐处理对盐地碱蓬幼苗肉质化的影响[J];植物学通报;2005年02期
11 马长乐,王萍萍,曹子谊,赵彦修,张慧;盐地碱蓬(Suaedasalsa)APX基因的克隆及盐胁迫下的表达[J];植物生理与分子生物学学报;2002年04期
12 曲元刚,赵可夫;NaCl和Na_2CO_3对盐地碱蓬胁迫效应的比较[J];植物生理与分子生物学学报;2003年05期
13 谷奉天;开发盐地碱蓬绿色系列食品研究[J];滨州教育学院学报;1999年03期
14 贾洪涛,高文,刘京贞,战祥强;盐胁迫下Na~+、K~+和Cl~-对碱蓬和玉米生理特性效应的比较研究[J];临沂师范学院学报;2002年03期
15 王丽萍,戚元成,赵彦修,张慧;盐地碱蓬GST基因的克隆、序列分析及其表达特征[J];植物生理与分子生物学学报;2002年02期
16 张海燕;盐胁迫下盐地碱蓬体内无机离子含量分布特点的研究[J];西北植物学报;2002年01期
17 顾淑荣,马庆虎,宋艳茹;碱蓬茎段培养再生植株的研究[J];植物学通报;1998年04期
18 王兴安,马宗琪,侯元同,张举仁,张慧山,赵彦修;碱蓬下胚轴试管再生植株的研究[J];曲阜师范大学学报(自然科学版);2001年01期
19 王文和,许玉凤;肥叶碱蓬叶和茎的解剖结构研究[J];植物研究;2005年01期
20 赵福庚,孙诚,刘友良,章文华,刘兆普;ABA和NaCl对碱蓬多胺和脯氨酸代谢的影响[J];植物生理与分子生物学学报;2002年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李法曾;张学杰;;中国碱蓬资源的开发利用研究状况[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年
2 马秀杰;张耀安;高晨光;;碱蓬在草原生态环境恢复中的作用[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
3 贾恢先;蔺海明;;中国内陆盐地药产业的培植与可持续发展的研究[A];中国植物学会七十周年年会论文摘要汇编(1933—2003)[C];2003年
4 陈敏;陈珈;王学臣;;玉米Na~+/H~+反向转运器编码基因zmNHX1的克隆及其表达特性分析[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
5 陈敏;陈珈;王国英;王学臣;;水稻Na~(+/)H~+反向转运器基因(OsNHX1)转化玉米及耐盐转基因植株的获得[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
6 范国兰;杜世勇;崔兆杰;薛海全;;现代黄河三角洲地区碱蓬中类二噁英类多氯联苯的分布规律研究[A];持久性有机污染物论坛2010暨第五届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集[C];2010年
7 邢军武;;碱蓬植物在海水入侵区域治理中的作用和意义[A];论沿海地区减灾与发展——全国沿海地区减灾与发展研讨会论文集[C];1991年
8 李光瑜;;新生代含盐地层孢粉分析方法的探讨[A];中国地质科学院地质研究所文集(4)[C];1982年
9 安瑞;陈其军;陈珈;王学臣;;一个拟南芥SOS1类似物基因的克隆及功能分析[A];2004中国植物生理生态学学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
10 孙艳香;王勇;杨宗歧;王宁宁;朱晔荣;;大豆液泡膜Na~+/H~+反向转运蛋白基因的克隆与表达分析[A];2005年全国植物逆境生理与分子生物学研讨会论文摘要汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 马秀灵;盐地碱蓬SsNHX1基因的克隆及转基因拟南芥的培育[D];山东师范大学;2003年
2 张学杰;过量表达盐地碱蓬cDNA文库及SsNHX1-AVP1对拟南芥耐盐性的影响和盐地碱蓬FAD7基因cDNA的克隆与表达分析[D];山东师范大学;2004年
3 李平华;盐胁迫下盐地碱蓬液泡膜质子泵表达分析及过量表达SsNHX1-AVP1对拟南芥耐盐性的影响[D];山东师范大学;2003年
4 石红旗;盐地碱蓬共轭亚油酸及其降脂功能研究[D];中国海洋大学;2003年
5 殷晓军;Ⅰ中亚滨藜盐诱导启动子的分离及功能鉴定 Ⅱ胁迫诱导盐地碱蓬促分裂原活化蛋白激酶激酶(SsMAPKK)的表达[D];山东师范大学;2002年
6 邱念伟;盐适应植物光合作用耐热性研究[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2004年
7 姜中珠;逆境条件下植物苗期适应性研究[D];东北林业大学;2009年
8 武峰;钠钙交换体在缺血预处理产生的心肌保护中的作用及其机制研究[D];第四军医大学;2008年
9 鲁斐然;大肠杆菌膜蛋白UraA和AdiC的结构和转运机制[D];清华大学;2011年
10 陆菁;Na~+-Ca~(2+)交换体在心、脑缺血和β-淀粉样肽损伤中的保护作用及药理学意义[D];中国协和医科大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 尹海波;盐地碱蓬SsVP和SsMAPKK基因的克隆与功能鉴定[D];山东师范大学;2003年
2 苏坤梅;不同浓度NaCl处理对盐地碱蓬营养器官内部结构的影响[D];山东师范大学;2003年
3 庞彩红;不同浓度NaCl处理对盐地碱蓬叶片中CAT、GR和GST的影响[D];山东师范大学;2004年
4 郭晓黎;盐地碱蓬SsPrx Q基因的克隆与功能鉴定[D];山东师范大学;2004年
5 曲元刚;NaCl和Na_2CO_3对盐地碱蓬和玉米胁迫效应的比较研究[D];山东师范大学;2003年
6 刘华;盐地碱蓬SsPIP基因的分子克隆及在盐胁迫下的表达特性分析与大豆遗传转化系统的建立[D];山东师范大学;2003年
7 张磊;盐地碱蓬(Suaeda salsa)EST数据库的构建及基因序列分析[D];山东师范大学;2001年
8 马长乐;盐地碱蓬SsAPX、SsCAT1和SsCAT2基因的克隆及盐胁迫下的表达分析[D];山东师范大学;2002年
9 包华音;NaCl胁迫对盐地碱蓬根、茎、叶液泡膜H~+-ATPase和H~+-PPase活性的影响[D];山东师范大学;2004年
10 李平华;钾及氯化钠处理对盐地碱蓬幼苗生长及液泡膜质子泵活性的影响[D];山东师范大学;2000年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李志杰 马卫萍 田娜 马福林;德州筛选培育出耐盐碱草坪‘盐地之光’[N];中国绿色时报;2004年
2 记者赵秋丽 通讯员胡平;我国成功克隆碱蓬耐盐关键基因[N];光明日报;2002年
3 本报记者 贾小军 贾鲁波;克隆碱蓬耐盐关键基因获得成功[N];山东科技报;2002年
4 孙波 刘泉龙;宁夏油气勘查开发吹响号角[N];中国矿业报;2002年
5 ;中国内陆盐渍化生物防治与可持续发展[N];科技日报;2004年
6 特约记者 俞言琳;博林公司开发“沙漠人参”肉苁蓉[N];中国花卉报;2005年
7 本报特约记者 曲长生;盘锦“红海滩”呼唤激情燃烧的岁月[N];中国石油报;2003年
8 吴明;海水蔬菜中掘金[N];江苏经济报;2007年
9 李富;内蒙古干盐湖是京津主要尘源[N];中国绿色时报;2007年
10 石峰;现代汽车资助查干诺尔治沙项目[N];国际商报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978