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大豆磷脂中磷脂酰肌醇的纯化及其抗小鼠脂肪肝实验研究

费云芸  
【摘要】:磷脂酰肌醇(Phosphatidyl inositol,PI)广泛存在于细胞膜与内质网上,代谢活跃,在细胞内,PI的肌醇环上第3、4、5位羟基在相应激酶催化下磷酸化形成多种PI衍生物,它们既可作为信号前体,在激动剂作用下产生第二信使,本身也可以直接参与许多细胞活动,诸如离子转运、膜泡运输、细胞骨架再组装、核基因调控和细胞凋亡等。PI具有重要的生理功能和独特的乳化性能,可被用于食品、保健品、医药、化妆品和工业制剂等许多领域。 分离纯化PI对于深入研究它的代谢、生理作用及开发它的药用价值都有着重要的意义。目前,国内主要是利用柱层析、薄层层析或高效液相色谱法分离制备少量的PI,用于实验分析研究,PI的分离提纯一直是研究的热点之一。大豆磷脂是应用最为广泛的食用、药用磷脂。本实验以大豆磷脂为原料,对PI的提取、分析方法及抗小鼠脂肪肝作用进行了研究。 本实验充分利用溶剂酸碱性、极性对磷脂溶解性的影响,通过简单的碱性乙醇抽提、液—液萃取、金属离子沉淀、DEAE—纤维素吸附,最终得到PI样品,含量为96.5%,提供了一种简单、有效的制备PI的方法。粗PI、高纯度PI、PI纯品的得率分别为纯化大豆磷脂量的42.82%,7.71%和0.35%。 本实验自制硅胶薄层板,优化色谱条件,分别采用酸性展开剂(氯仿:甲醇:醋酸:水=50:25:10:2)和碱性展开剂(氯仿:甲醇:氨水=50:25:4),上行展开12cm,得到满意的分离效果,可用于PI的定性分析。溴百里酚蓝碱液浸板法显色后扫描定量,此方法简便可行。 低剂量、间隔腹腔注射CCl_4,同时饲喂高脂饲料(含猪油10%,胆固醇2%),诱导小鼠脂肪肝动物模型,同时灌胃高纯度PI,观察结果表明PI对小鼠CCl_4诱导的脂肪肝有一定的防治作用,表现为降低小鼠的肝脏系数,明显降低血清胆固醇和甘油三酯水平,减轻肝细胞的脂肪变性及肝脏炎症反应。推测其抗脂肪肝作用机理与代谢产生肌醇有关。


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