几种荧光探针在临床分析中的应用

【摘要】： 在临床生化检验中,血液中各种酶活力的测定都是很重要的酶学诊断指标。碱性磷酸酶的活性测定就是临床上最常见的血清酶活力测定项目之一,临床上常把碱性磷酸酶活性测定作为诊断肝胆疾病和骨骼疾病的辅助指标。底物是酶活性分析测定中的重要试剂。因此,新底物的开发研究对于建立有效的酶活性测定方法具有重要意义。 肝素为葡糖胺聚糖,是蛋白多糖的一种。肝素具有广泛的生物学功能,在体内外均有延缓或阻止血液凝固的作用。作为经典的抗凝血药物,肝素在临床上的应用已达60年之久,目前仍是心血管和血栓病人的首选抗凝血药,肝素或其衍生物还可用于调血脂、改善血液流变学指标、抗炎、抗过敏及免疫调节等,是重要的生化药物之一。 多巴胺和5-羟色胺都是神经中枢系统内重要的神经递质,具有重要的生理作用。多巴胺失调与帕金森氏症、精神分裂症等疾病的发生有密切的关系。盐酸多巴胺作为一种药物,能增强心肌收缩力,对内脏血管有扩张作用,增加血流量,有利于改善休克时重要脏器的血液供应。5-羟色胺,又叫血清素,它能促进血管平滑肌细胞的收缩、增生、迁移,参与血压的调节,活化血小板,参与行为活动、情绪、食欲、体温调节等。测定体液中5-羟色胺含量可为多种疾病的诊治及精神疾病的机理研究提供依据。 本论文以上述几个方向作为研究对象,以分子光谱(荧光、紫外)作为研究手段,研究了几种有效的荧光探针与它们之间的相互作用,建立了荧光分析的新方法并用于实际样品的测定。论文共分为四章。 第一章,综述了论文的情况及目前国内外的研究现状。 第二章,合成了两种新的荧光底物——2-羧基-1-萘磷酸酯和8-喹啉基磷酸酯用于碱性磷酸酶活性的测定。确定了实验的最佳条件,测定了酶反应的动力学常数,建立了荧光法测定碱性磷酸酶活性的新方法。新方法成功地应用于血清中碱性磷酸酶活性的测定,为临床分析检验提供了可供选择的新方法。 第三章,四环素药物具有β-二酮结构,是铕离子的理想配体,利用四环素-铕络合物作为荧光探针分析测定了生物分子肝素。确定了实验的最佳条件,求算了肝素与四环素-铕络合物作用的结合常数和结合位点数,研究了表面活性剂对体系荧光强度的影响。建立了一种测定肝素的新方法,同时探讨了作用机理,并成功地用于针剂及血样中肝素的测定。 第四章,合成了既具有β-二酮结构又含有磺酰氯基团的双功能配体——噻吩甲酰三氟丙酮磺酰氯。噻吩甲酰三氟丙酮磺酰氯既是铕离子的理想配体,又能与多巴胺或5-羟色胺分子有效结合。据此,以噻吩甲酰三氟丙酮磺酰氯-铕络合物作为荧光探针,提出了测定多巴胺和5-羟色胺的新方法,并成功地用于实际样品的测定。