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黑线仓鼠LHR部分序列克隆及组织器官的表达差异

谢海燕  
【摘要】:我国是一个农业大国,粮食产量的高低不仅关系着国计民生,对于世界粮食的储备安全也有着举足轻重的影响。黑线仓鼠是我国北方农作区的一种主要害鼠,每年都会因其损失几亿斤粮食。近年来,黑线仓鼠不仅破坏粮食生产,对于干旱、半干旱地区的草原和林地生态系统的危害也越来越显著。在自然灾害日益频发和生态环境日益恶化的今天,有关黑线仓鼠的研究资料还很贫乏,因此研究黑线仓鼠种群繁殖机制,为综合防控黑线仓鼠的危害提供理论依据尤为必要。 促黄体生成素受体(luteotropic hormone receptor, LHR)是一种在动物生殖调控中发挥重要作用的受体蛋白,是研究动物繁殖能力的候选基因之一。在雌性动物中,LHR与其配体黄体素结合,通过下丘脑-腺垂体-卵巢轴的调节完成排卵、受精卵的着床及妊娠过程。在雄性动物中,促进间质细胞分泌睾酮和支持细胞的分化。本文利用分子克隆的方法依据大鼠(Rattus norvegicus)、小鼠(Mus musculus)、金仓鼠(Mesocricetus auratus)的同源序列,设计并筛选出1对特异性较好的引物,扩增出154bp序列。该段序列处于外显子11的5'端,编码51个氨基酸,包含部分铰链区和第1个跨膜α螺旋(Transmemberane region, TM1)区。疏水性氨基酸所占比例相当高,其中缬氨酸、异亮氨酸各占9.80%,亮氨酸为19.61%,通过疏水性分析,TM1区具有典型的α螺旋特征。与大鼠、小鼠、金仓鼠等物种同源比对,核苷酸和氨基酸的同源性分别达到了83%-98%、82%-100%。α螺旋跨膜区的氨基酸同源性超过82%具有很强的保守性,但在26、41、44、48位点上仍然表现出种属之间的差异性。制作石蜡切片,对黑线仓鼠的睾丸横切面进行了观察,确定黑线仓鼠处于发情期。利用实时荧光定量的方法,对处于发情期黑线仓鼠7种器官中LHR的表达水平进行了比较。结果发现,在睾丸、附睾、储精囊、肾上腺、脑、胃、肾脏中都有LHR的表达,并且睾丸表达量最高,其表达量是附睾的1.745倍,储精囊的13.193倍,肾上腺的50.505倍,脑的44.843倍,胃的25.253倍,肾脏的120.482倍。秋、冬两季LHR在睾丸、附睾中的表达水平差异不显著;在储精囊、脑、胃、肾脏中表达水平差异显著。LHR在不同器官中的表达差异十分显著,这说明LHR除了对动物的繁殖有重要影响以外,对于其他生理活动的调节也有着显著的作用。同时,同一器官在不同季节的表达也有差异。


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