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姜黄素抑制K562细胞生长并诱导凋亡机制的研究

胡姬婷  
【摘要】: 目的 观察姜黄素诱导人白血病细胞株K562凋亡作用及其细胞周期的变化,同时观察其对凋亡相关基因BCL-XL和BAK表达的影响。探讨姜黄素抑制人白血病细胞K562生长并诱导凋亡的机制,指导临床白血病的化学药物治疗。 材料与方法 1细胞培养 以人类白血病细胞株K562为研究对象。将K562细胞置于体积分数为10%的新生胎牛血清的RPMI-1640培养基中,37℃、5%二氧化碳孵箱中培养;取对数生长期细胞,0.4%台盼蓝染色,细胞活性在98%以上,调整细胞密度为1×106个/mL,0.9ml/孔接种于24孔板进行实验。 2实验检测 将对照组和经10umol/L、30umol/L、50umol/L、100umol/L的姜黄素干预的实验组细胞于24h和48h后分别收集起来,用流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期的变化,RT-PCR方法检测BCL-XL和BAK的mRNA的表达变化,免疫组化法检测BCL-XL和BAK蛋白的表达。 3统计学处理 采用SPSS13.0统计软件处理,数据以均数±标准差(x±s)表示,经方差齐性检验后采用单因素方差分析,以α=0.05为检验水准。 结果 姜黄素可以对K562细胞有较明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖与时间依赖,流式细胞术结果显示姜黄素浓度在100μM时作用24小时后,凋亡率为(58.53±1.08)%,对照组凋亡率为(1.12±0.20)%,与对照组相比明显增高(P0.05);姜黄素浓度在100μM时作用48小时后,凋亡率为(84.70±1.53)%,对照组凋亡率为(1.25±0.19)%,与对照组相比明显增高(P0.05);随着姜黄素浓度增加,作用于K562细胞后可以使其倍增时间明显延长,G1期细胞增多,S期细胞减少;RT-PCR结果显示姜黄素能下调K562细胞BCL-XL mRNA的表达,上调BAKmRNA的表达(P0.05),免疫组化法发现姜黄素可以降低BCL-XL蛋白的表达,升高BAK蛋白的表达(P0.05)。 结论 1姜黄素可以诱导K562细胞凋亡,且凋亡率呈时间和剂量依赖性。 2姜黄素可以影响K562的细胞周期,主要将其阻滞于G1期。 3随姜黄素浓度的增高,上调了BAK的mRNA和蛋白在K562细胞中的表达,下调了BCL-XL的mRNA和蛋白在K562细胞中的表达,可能和p53的信号转导相关。


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