肾移植术后患者PBMCs中NF-κB的活性和TNF-α mRNA的表达研究

【摘要】： 核因子-κB(nuclea factor-kappaB, NF-κB)是由Sen等于1986年首次从B细胞核提取物中发现的一种能与免疫球蛋白κ轻链基因的增强子κB序列特异结合的蛋白因子。静息状态下,NF-κB与抑制蛋白IκB结合成三聚体而存在于细胞质中。激活后,NF-κB转入细胞核,与相应的靶基因启动子或增强子上的基序结合,调节这些基因的转录活性。 肾移植是目前治疗终末期肾最有效的方法,近年来取得很大的进展。随着免疫抑制治疗的不断完善和手术技术的日趋成熟,术后存活率明显提高。然而,由于按体重给药,术后发生排斥和感染的情况并不少见。这可能与个体的免疫水平相关。 近年来研究发现,NF-κB的激活不仅参与了肿瘤发生发展的许多环节,而且已经成为肿瘤治疗的又一靶标。而在炎症与免疫方面,NF-κB作为一种重要的转录因子,也起着重要的中介作用,已经证实它与许多炎症性疾病密切相关,如类风湿性关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病等。在器官移植方面,特别是肾移植方面的研究,肾脏移植术后急性排斥反应时,NF-κB被激活在动物实验中已有相关报道。在肾移植术后发生感染病人方面的临床研究,还未曾报道。 肿瘤坏死因子-α(Tumour necrosis factor, TNF-α)是移植物排斥反应中调节因子,可以介导多种炎症及免疫反应。在移植排斥反应中的重要作用已被公认,但是其作用机制尚未完全明了。之前的研究主要是用放射免疫方法检测血浆中可溶性TNF-α,而检测细胞内TNF-α的mRNA表达鲜有报道。 目的： 通过对肾移植术后病人外周血单个核细胞内NF-κB的活性检测及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA的表达检测,研究NF-κB和TNF-α与肾移植术后病人个体免疫状态水平的相关性。旨在探讨NF-κB和TNF-α是否能成为肾移植术后病人免疫状态的检测指标。 方法： 1用密度梯度离心法分离肾移植术后病人及健康对照组外周血单个核细胞。 2用化学发光凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法检测肾移植术后病人外周血单个核细胞内NF-κB的活性。 3采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾移植术后病人外周血单个核细胞内TNF-αmRNA的表达情况。 4用SPSS17.0统计软件处理,数值用均数±标准差(X±S)表示。实验结果,经方差齐性检验后,各组间用单因素方差分析(F检验)或者Kruskal-Wallis检验,检验水准α=0.05。 结果： 1肾移植术后稳定组,感染组,排斥组患者外周血单个核细胞内NF-κB的活性分别为4.65±1.37、16.43±5.97、56.18±12.58,健康对照组单个核细胞内NF-κB的活性为2.70±0.58。稳定组和感染组,稳定组和排斥组,感染组和排斥组结果差异有统计学意义(P0.05)。健康对照组和术后稳定组结果差异无统计学意义(P＞0.05)。 2肾移植术后稳定组,感染组,排斥组患者外周血单个核细胞内TNF-α的mRNA的表达量分别为0.445±0.12、0.546±0.11、0.622±0.10,健康对照组单个核细胞内TNF-α的mRNA的表达量为0.419±0.16。稳定组和感染组,稳定组和排斥组,结果差异有统计学意义(P0.05)。感染组和排斥组,健康对照组和术后稳定组结果差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论： 1肾脏移植术后发生排斥时,外周血单个核细胞内NF-κB的活性和TNF-α的mRNA的表达水平显著升高。 2肾脏移植术后发生感染时,外周血单个核细胞内NF-κB的活性和TNF-α的mRNA的表达水平也升高。与排斥反应组相比,NF-κB的活性差异有统计学意义,而TNF-α的mRNA的差异无统计学意义。 3NF-κB的活性和TNF-αmRNA的表达水平不排除非线性相关,两者有望成为肾移植术后患者免疫状态的检测指标。