氟康唑对hERG钾通道电生理功能的影响

【摘要】： 目的 研究氟康唑对野生型hERG(wild type hERG, WT-hERG)钾通道电流和Y652和F656位点突变的hERG钾通道电流的作用,探讨其延长QT间期的作用机制,从而为氟康唑在临床上的安全使用提供实验依据。 方法 1采用磷酸钙瞬时转染的方法把WT-hERG转染进人胚肾细胞(Human Embryonic Kidney, HEK293),应用全细胞膜片钳技术记录氟康唑对HEK293细胞上的hERG钾电流及其动力学曲线的影响(激活、失活)。 2把Y652和F656位点突变的hERG转染进HEK293细胞,记录氟康唑对HEK293细胞上的Y652A-hERG和F656C-hERG钾电流,并比较氟康唑对WT-hERG和突变hERG钾电流的作用。 结果 1氟康唑浓度依赖性的抑制WT-hERG钾通道时间依赖性电流和尾电流,其半数最大抑制浓度(Half-maximum block concentrations, IC50)为48.2±9.4μM。 2氟康唑对WT-HERG钾通道的激活曲线和稳态失活曲线没有显著影响。10μM的氟康唑作用前后：对激活曲线,半数最大激活电压V1/2从-3.9±0.3 mV变化为-6.3±0.5 mV(P0.05,n=9),激活系数k由10.4±0.3变为10.3±0.4(P0.05,n=9)；对稳态失活曲线,半数失活电位V1/2由-43.3±0.8 mV变化为-43.1±0.9 mV(P0.05,n=9),失活系数k由22.9±0.6 mV变化为23.6±0.8 mV(P0.05,n=9)。其差异在统计学上无显著意义。 3氟康唑对Y652A-hERG和F656C-hERG的抑制作用与WT-hERG相比大大减弱。在300μM的氟康唑作用下,对Y652A-hERG,氟康唑抑制WT-hERG为61.1±2.7%,而抑制Y652A-hERG为22.8±5.6%；对F656C-hERG,氟康唑抑制WT-hERG为 41.7±3.7%,而抑制F656C-hERG为29.8±6.3%,其结果在统计学上具有显著意义(P0.01, ANOVA)。 结论 1氟康唑能够显著抑制转染WT-hERG钾通道的HEK293细胞的钾电流,且抑制呈浓度依赖性而不具有频率依赖性。 2氟康唑不影响WT-hERG转染HEK293细胞钾通道的激活动力学和失活动力学特征。 3氟康唑对S6区域Y652和F656位点突变的hERG钾通道电流的抑制作用显著减弱,Y652和F656是氟康唑与hERG钾通道相互作用的重要位点。