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显微穿刺纠正人类三原核合子后胚胎发育潜能及非整倍体研究

金海霞  
【摘要】:第一部分:多精受精在短时受精中的发生情况及卵丘细胞对多精受精发生的影响 研究目的: 探讨多精受精在短时受精中的发生情况以及卵丘细胞对多精受精发生的影响。 研究方法: 回顾性分析2008年1月-2010年12月在郑州大学第一附属医院生殖医学中心接受IVF治疗的患者,按受精时间分为长时受精组(1104周期)和短时受精组(1199周期)。其中短时受精组中47例患者的791个卵子按照周围有无卵丘细胞分为无卵丘细胞组(389个卵子)和有卵丘细胞组(402个卵子),比较各组的正常受精率、多精受精率、优质胚胎率及胚胎利用率、临床妊娠率等。 结果: 1长时受精与短时受精两组患者平均年龄、周期数、不孕年限、平均取卵数无明显差异(P0.05)。两组正常受精(2PN)率无差异,但长时受精的OPN率、1PN率明显偏高,而短时受精组3PN率可高达7.9%,明显高于长时IVF组。 2短时受精的卵子利用率(59.3%VS54.6%)、优质胚胎率(70.5%VS65.胚胎利用率(84.9%VS79.2%)明显高于长时受精组。两组妊娠率无明显差异(P0.05)。 3短时受精组中无卵丘细胞组多精受精率(0.96±1.14)要明显高于有卵丘细胞组(0.47±0.72)(P0.05),其余正常受精率、1PN受精率、未受精率、胚胎卵裂率、优质胚胎率、胚胎利用率均无明显差异(P0.05)。 结论: 1短时受精中多精受精发生率高达7.9%,明显高于长时受精。 2短时受精可以提高卵子利用率、优质胚胎率及胚胎利用率,同时不改变临床妊娠结局,是一种安全有效的受精方式。 3推迟受精过程中去除卵丘细胞的时间可有效减少多精受精的发生。 第二部分:多精受精中原核的平均直径及显微穿刺纠正三原核对胚胎发育潜能的影响 研究目的: 检测原核直径大小,显微穿刺纠正人类三原核合子后胚胎第一次卵裂模式及显微穿刺去核纠正技术对胚胎发育潜能的影响。 研究方法: 以2011年1月-2012年12月间在郑州大学第一附属医院生殖中心行短时IVF-ET的不孕夫妇受精卵为研究对象。收集三原核受精卵,其中338个采用显微穿刺技术去除多余原核的受精卵作为实验组,381个未去原核三原核受精卵作为阴性对照组,同期同一患者的两原核受精卵共1797个作为阳性对照组。测量各个原核的直径大小并比较三原核中各个原核直径的大小。比较各组的受精卵的第一次卵裂方式、6-8细胞胚胎形成率、优质胚胎形成率、D5或D6囊胚形成率等。 结果: 1原核总的平均直径在22.95±1.80μm,95%在22.84-23.06μm之间。三原核合子中最大、中等、最小的原核平均直径大小分别为24.06±1.58μmm、22.97±1.381μm、21.82±1.691μm,三者之间有显著性差异(P0.01)。 2去原核操作的三原核合子共有338个,去核成功的有314个,显微穿刺抽取原核的成功率为92.9%。 3实验组合子第一次卵裂为2细胞的比率为74.3%,明显高于阴性对照组(36.4%)(P0.05),第一次卵裂为3细胞的比率前者明显低于后者(25.7%VS63.6%)。实验组合子第一次卵裂为2细胞的比率明显低于阳性对照组(74.3%VS86.0%)(P0.01),第一次卵裂为3细胞的比率前者明显高于后者(25.7%VS14.0%)。阴性对照组合子卵裂为2细胞的比率明显低于阳性对照组(36.4%VS86.%)(P0.01),卵裂为3细胞的比率阴性对照组明显高于阳性对照组(63.6%VS14.0%)(P0.01)。 4D3天6-8细胞胚胎形成率三组分别为88.1%、87.6%、65.5%,阴性对照组与实验组无显著差异(P0.05),阳性对照组明显低于实验组、阴性对照组(P0.01)。总囊胚形成率三组分别是21.5%、5.6%、58.7%,阳性对照组囊胚形成率明显高于实验组及阴性对照组(P0.01),阴性对照组囊胚形成率明显低于实验组(P0.01)。D5囊胚形成率实验组(8.9%)和阴性对照组(1.9%)明显低于阳性对照组(53.6%),实验组D5囊胚形成率高于阴性对照组(P0.01)。实验组D6天囊胚形成率(12.5%)明显高于阴性对照(3.7%)与阳性对照组(5.1%)(P0.01),而阴性对照与阳性对照组则无差别(P0.05)。 结论: 1原核总的平均直径在22.95±1.80μm,大多在21.81~24.13μmm之间,95%在22.84-23.06μm之间。三原核合子中原核平均直径大小有差异。 2显微穿刺纠正三原核合子后第一次卵裂的卵裂模式主要以2细胞为主,纠正后能明显改善异常卵裂,但未达到正常受精合子第一次卵裂的水平。 3显微去核技术纠正三原核合子的多余原核,能够明显提高胚胎的进一步发育潜能,但其作用有限,去核后胚胎的发育潜能仍低于正常受精胚胎。 第三部分显微穿刺纠正人类三原核合子后胚胎非整倍体性及亲缘性研究 研究目的: 本研究用SNP微阵列技术检测显微纠正三原核合子后发育囊胚的非整倍体情况,同时对其进行亲缘性鉴定,为这些来源的胚胎能否用于移植及替代正常胚胎用于干细胞的研究提供理论支持。 研究方法: 收集第二部分显微穿刺去原核实验组培养至第D5或D6共30个囊胚,为纠正后囊胚组;同时选取30个去原核后未形成囊胚的D5或D6胚胎,为纠正后未形成囊胚组:另一组为第二部分三原核未去原核组形成的囊胚共12个,为三原核囊胚组;正常受精合子形成的囊胚来自郑州大学第一附属医院生殖中心2013年1月至3月行PGD的病人,共10个周期,57个囊胚,作为第四组。利用基因芯片对这四组囊胚的23对染色体进行分析,比较四组囊胚的二倍体、三倍体及非整倍体情况。另对纠正后形成的35个囊胚通过与父母源性DNA比对进行亲缘性分析。 结果: 1显微穿刺纠正三原核合子后形成的囊胚的正常二倍体率为44.4%,明显高于纠正三原核合子后无囊胚形成组19.2%及三原核囊胚组0.91%(P0.05),与正常受精囊胚组56.9%相比,无统计学差异(P0.05)。 2显微穿刺纠正三原核合子后形成的囊胚的非整倍体率为55.5%,明显低于纠正三原核合子后无囊胚形成组80.8%及三原核囊胚组90.9%(P0.05),但与正常受精囊胚25.5%相比,明显增高,有统计学意义(P0.05)。 3对第二部分显微穿刺纠正人类三原核合子后形成的囊胚共35个进行遗传物质父母来源即亲缘性鉴定。单囊胚DNA扩增失败3个。25个囊胚遗传物质是来自于父母双方,占78.1%,6个囊胚仅来自于父方,占18.8%,1个囊胚仅来自于母方,占3.1%。 结论: 1显微穿刺纠正三原核合子有利于重建胚胎的二倍体性,降低囊胚的非整倍体率。 2显微穿刺纠正三原核合子后胚胎发育停滞,与胚胎的染色体严重异常有关。 3重建三原核合子胚胎的二倍体性,再进行PGD技术和亲缘性鉴定,可用于临床治疗。


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