收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

特发性膜性肾病流行病学及其新型生物标志物探索

郑栓  
【摘要】:膜性肾病(membranous nephropathy,MN)是成年人原发性肾小球疾病中的最常见病理类型之一,其典型病理特点表现为肾小球基底膜的弥漫性增厚和上皮细胞下免疫复合物的沉积。病因可分为特发性和继发性,称为特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)和继发性膜性肾病(secondary membranous nephropathy,SMN)。膜性肾病中有约1/4由继发性因素引起,如狼疮性肾炎(SLE-LN)等自身免疫性疾病、感染(各种病毒,尤其乙肝病毒)、机体的恶性肿瘤、其他(药物、毒物)等,有研究显示,在我国IMN约占原发性肾小球疾病的9.89%,且有上升趋势,其中,在中老年人群中高发。不同年龄、不同个体MN患者预后存在较大差异,仅1/3的MN患者可出现自发缓解,具有易反复发作、慢性迁延的特点,约30~40%的患者治疗效果欠佳,在5~15年内进展至肾功能不全。近年来,随着肾穿刺活检技术的临床普及和技术提升以及不同区域肾病综合征登记系统的完善与更新,MN的流行病学特点逐渐为肾脏病专业医务人员所重视,国内外大量流行病学调查研究资料显示,MN的发病率呈逐年上升的趋势。近期,来自国内的一项多中心研究资料显示MN在近11年间正以每年13%的速度增长。目前,人们对IMN发病机制尚无确切认识。但近年来,随着对IMN认识的更加深入和基础研究技术的发展,关于IMN发病机制的研究在国内外相关领域均取得了突飞猛进的进展。自鼠Heymann肾炎模型成功问世,之后陆续发现了中性肽链内切酶、PLA2R、SOD2及阳离子化牛血清白蛋白等靶抗原。大量研究资料均发现靶抗原、循环抗体、补体激活等在IMN发病中的重要作用。近年来,来自世界范围内的多个研究资料均提示了氧化应激在高血压肾损害、糖尿病肾病、间质性肾炎及急性肾损伤等肾脏疾病中的重要作用,而在IMN发病机制中的作用相关研究相对较少。本研究分为以下三个部分:第一部分:MN的流行病学,揭示MN的患病率情况;第二部分:探索了 IMN的新型生物标志物,检测LncRNA在IMN患者肾组织及血液中的异常表达;第三部分:从临床对照角度证实LncRNA差异表达,并验证其下游氧化应激效应参与IMN的发病机制。旨在揭示MN的流行病学特点、筛选IMN的新型生物标志物、探索MN的发病机制,为减少MN的发生、延缓MN的进展、提供理论依据和数据支持。第一部分膜性肾病的流行病学背景膜性肾病(membranous nephropathy,MN)是成年人原发性肾小球疾病中的最常见病理类型之一,其典型病理特点表现为肾小球基底膜的弥漫性增厚和上皮细胞下免疫复合物的沉积。其中,在中老年人群中高发。MN具有易反复发作、慢性迁延的特点,不同年龄、不同个体预后存在较大差异,仅1/3的MN患者可出现自发缓解,约30%~40%的患者治疗效果不佳,预后较差,在5~15年内进展至终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)。近年来,随着肾穿刺活检技术的临床普及和技术提升以及不同区域肾病综合征登记系统的完善与更新,MN的流行病学特点逐渐为肾脏病专业医务人员所重视。目的本研究为以郑州大学第一附属医院2010-2015年肾脏病理为研究对象,揭示河南地区MN的流行病学变化,对近年来国内外MN流行病学的相关高质量文献资料进行了整理和数据提取,系统评价MN的流行病学现状和进展趋势,旨在揭示MN的流行病学特点,为指导MN的临床防治提供理论依据和数据支持。结果1.2010~2015年间,河南省肾活检病理标本中,MN占比25.6%,各年分别为371 例、591 例、938 例、1047 例和 1254,占比分别为 16.6%、19.6%、27.9%、29.7%、32.6%。趋势性检验显示,呈递增趋势(P0.05)。2.2010~2015年河南省IMN所占比例亦呈逐年增加趋势(P0.05)。2010-2015年间,IMN在原发性肾小球疾病(primary glomerular disease,PGD)中所占比例逐年上升,各年分别为209例、336例、486例、666例、867例、1115例;占比分别为 14.5%、16.8%、22.6%、29.4%、34.4%、40.4%。3.系统分析显示国内MN在原发性肾小球疾病中约占8.6%~23.9%,多位居前三位,近年来其发病率有升高趋势;国外所占比例也呈上升趋势。4.MN流行病学具有地域差异性,全球范围内不同底蕴的MN患病率差异较大,发展中国家MN患病率普遍高于发达国家。结论1.河南省MN,尤其是IMN发病率逐年上升,并呈年轻化趋势;2.MN在全世界范围内的患病率均较高,在PGD中约占6.0~28.8%。第二部分长链非编码RNA在特发性膜性肾病患者体内的差异表达背景长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)是一类无蛋白编码功能的RNA,其能够与DNA、RNA及蛋白质相结合,在多种层面上调控基因的表达水平,已有研究表明其主要在转录(后)、表观遗传等层面进行调控。目前分子生物学界的众多研究表明LncRNA具有多种生物学功能,可编码启动子区基因发生转录从而干扰下游基因表达、介导染色质的重构和组蛋白的修饰影响下游基因表达等等。特别是最近3-5年,关于LncRNA的研究日新月异,但是人们现已了解到的LncRNA数量仍然十分有限,对绝大多数的lcRNA的功能仍不甚明了。对于LncRNA与疾病的相关研究已在各个领域如火如茶的开展。肿瘤、心血管系统、免疫系统等疾病都与LncRNA的调控有关。更有学者提出LncRNA可以作为疾病早期诊断的生物标记物及治疗靶点。针对LncRNA异常进行研究和纠正,已经成为探索疾病发病机制及治疗靶点的新思路。关于LncRNA(长链非编码RNA)在人体内的差异表达与肾脏疾病的发生密切相关的报道也屡见不鲜,LncRNA的差异表达是否与膜性肾病发生发展相关尚不得而知。2015 年,有报道提出 LncRNA MIR210HG、linc-ATP13A4-8、and linc-KIAA1737-2参与炎症及缺氧导致的肾小管上皮细胞损伤;膜性肾病的研究中,LncRNAXist参与炎症及缺氧导致的足细胞损伤,在患者尿液中表达增多,可考虑作为膜性肾病的生物标记。这些均表明LncRNA与膜性肾病的发生密切相关,但相关研究却鲜见报道,另外LncRNA的表达改变是否与肾组织中氧化应激有关尚不得而知。目的分析LncRNA在特发性膜性肾病(IMN)患者肾组织及血液中的表达情况,并筛选出可能与IMN的发病机制有关的LncRNA,探讨LncRNA在IMN诊断中的作用。方法2017年1月至2017年3月收集3例IMN患者的新鲜肾组织及全血标本,Trizol试剂提取总RNA,用NanoDrop ND-1000紫外可见分光光度仪及变性琼脂糖凝胶电泳进行RNA检测。通过Arraystar Human LncRNA Microarray芯片筛选IMN患者肾组织和全血标本与正常人肾组织及全血标本中的差异表达LncRNA,并分析其表达情况,再将全血及肾组织中同时上调下调的LncRNA进行交叉分析。结果1.与正常肾组织相比,在IMN患者肾组织中差异表达2倍以上的LncRNA有1771个,其中712项表达上调、1059项表达下调。2.与正常人全血标本相比,在IMN患者全血中差异表达2倍以上的LncRNA有509项,其中242项表达上调、267项表达下调。3.交叉分析结果显示:IMN患者全血标本与肾组织中共同上调且差异表达2倍以上的 LncRNA 有 9 项,分别为:ENST00000510094,NR_033412,ENST00000433035,ENST00000602973,T297967,ENST00000426412,ENST00000433505,NR_110236,NR_040073;共同下调且差异表达2倍以上的LncRNA 有 6 项,分别为:T074169,T302890,GSE61474_TCONS_00281832,NR_046174,T307836,ENST00000606186。结论ENST00000510094等多个LncRNA在IMN患者肾组织及血液中差异表达,推测其参与IMN发生机制,有可能成为IMN分子诊断和基因治疗的新靶点。第三部分氧化应激在特发性膜性肾病发生机制的研究背景膜性肾病(membranous nephropathy,MN)是一种常见的原发性肾小球疾病,以其病理形态学诊断命名,是成年人原发性肾小球疾病中的最常见病理类型之一,其典型病理特点表现为肾小球基底膜的弥漫性增厚和上皮细胞下免疫复合物的沉积,免疫荧光显示在肾小球毛细血管壁存在C3和IgG呈细颗粒状沉积,在中老年人群中高发。近期,来自国内的一项多中心研究资料显示,在2004~2014年近11年间的71151例肾活检患者资料中,膜性肾病占23.4%,成为继IgA肾病后的第二大病理类型,且预测正以每年13%的速度增长。在第二部分中,我们筛选了 IMN患者血和肾组织标本差异表达的LncRNA,其中,全血标本与肾组织中共同上调且差异表达2倍以上的LncRNA有9项,分别为:ENST00000510094,NR_033412,ENST00000433035,ENST00000602973,T297967,ENST00000426412,ENST00000433505,NR_110236,NR_040073,进一步检索基因库和既往相关研究发现ENST00000433035下游与氧化应激密切相关,本部分通过临床对照研究,拟探索氧化应激参与IMN发生的机制。近年来,在对肾脏疾病的相关研究中,国内外诸多研究资料均提出氧化应激(oxidative stress,OS)在肾脏疾病中“扮演”着重要角色。当机体受到有害刺激时,机体处于的一种应激状态即为OS,导致活性氧成分增多,机体的氧化和抗氧化系统紊乱失衡。目前,普遍公认的机体抗氧化生物标志物主要是超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和血红素氧合酶-1(heme oxygenase,HO-1),其中SOD分布广泛,在动植物和微生物中均有“踪迹”。其根据分布位置不同分为三种类型:SOD1(最常见,主要分布于细胞浆中)、SOD2(主要分布于真核细胞的线粒体内和原核细胞内,也是抗氧化保护系统的重要组成部分)、SOD3(主要分布于原核细胞中)。可将具有毒性的超氧化物阴离子转化为过氧化氢(H202)双原子氧(02),在机体OS反应过程中发挥着重要作用,被称为“氧自由基清除剂”。OS反应过程中,机体损伤标志物还有多种,其功能不同、表现各异,其中丙二醛(malondiadehyde,MDA)作为过氧化终产物,是在机体受到外界各种有害刺激时,机体内的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,表现为脂质的氧化损伤;最为DNA损伤的敏感性和特异性指标的8-羟基脱氧鸟苷(8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG),是在机体受到外界刺激时ROS的大量释放,导致在体内蓄积,致使氧化抗氧化系统失衡,表现为核酸的氧化损伤。既往已有研究发现,膜攻击复合物可导致肾小球足细胞的活化,从而产生OS反应,且已在MN患者血清中发现特异性表达的超氧化物歧化酶(SOD2)IgG4抗体,免疫荧光检测发现其在肾小球中亦有表达。近年来,国内外诸多研究资料均提出氧化应激在糖尿病肾病、高血压导致的肾损害、急慢性间质性肾炎等肾脏疾病中的重要作用,而对其在IMN发病机制中作用的相关研究资料相对较少。目的1.验证设想:作为OS重要标志物的超氧化物歧化酶、血红素氧合酶-1、丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷在IMN患者肾组织和血清、尿液中是否存在高分布或者表达;2.探讨氧化应激相关因子超氧化物歧化酶、血红素氧合酶-1、丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷与特发性膜性肾病发病机制之间的关系。方法选取对象全部来自于2016年6月至2017年6月在郑州大学第一附属医院肾脏内科收治并行首次肾穿刺病理活检证实为MN的患者为研究对象,其中50例IMN患者、30例SMN患者、30例微小病变性肾病患者;另选取在我院行肾脏切除手术的正常肾脏组织10例及30例健康成年人的血和尿标本为空白对照。采用ELISA法检测四组研究对象血清和尿液中SOD、HO-1、MDA、8-OHdG的浓度水平;应用免疫组化法检测四组研究对象肾组织中SOD、HO-1、8-OHdG的表达面积和分布。结果1.特发性膜性肾病患者血清中ENST00000433035表达水平高于继发性膜性肾病组和微小病变组。2.通过ELISA法对血清标本中SOD、HO-1、MDA及8-OHdG氧化应激相关因子的浓度水平进行分析,结果显示,IMN组患者SOD、HO-1、MDA及8-OHdG血清浓度水平均显著高于MCD及NC组,差异有统计学意义(P0.05),均稍高于SMN组;SMN组患者SOD、HO-1、MDA及8-OHdG血清浓度水平均显著高于NC组,差异有统计学意义(P0.05),均稍高于MCD组,除8-OHdG外,其余组间差异无统计学意义(P0.05)。3.通过ELISA法对尿液标本中SOD、HO-1、MDA及8-OHdG氧化应激相关因子的浓度水平进行分析,结果显示,IMN组患者SOD、HO-1、MDA及8-OHdG尿液浓度水平均显著高于MCD及NC组(P0.05),均稍高于SMN组(P0.05);SMN组患者SOD、HO-1、MDA及8-OHdG血清浓度水平均显著高于NC组(P0.05),均稍高于MCD组,除8-OHdG外,其余组间差异无统计学意义(P0.05)。MCD组患者SOD、HO-1、MDA及8-OHdG血清浓度水平均显著高于NC组(P0.05)。4.通过免疫组化对肾组织标本中SOD、HO-1及8-OHdG氧化应激相关因子的浓度水平进行半定量分析,结果显示,SOD主要分布在肾小球和肾小管,且在肾小管中的分布显著广泛于肾小球,HO-1在肾小球及肾小管中均有分布,8-OHdG主要分布于细胞核,在细胞质有较少分布。IMN组患者SOD、HO-1、8-OHdG表达面积均显著高于MCD及NC组(P0.05),稍高于SMN组(P0.05);SMN组患者SOD、HO-1、8-OHdG表达面积均显著高于NC组(P0.05),稍高于MCD组。MCD组患者SOD、HO-1、8-OHdG表达面积稍高于NC组,但差异无统计学意义(P0.05)。结论IMN患者血清、尿液和肾组织中SOD、HO-1、MDA及8-OHdG浓度水平显著升高,证实了氧化应激在IMN发病机制中的重要作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前16条
1 孙彬彬;张蓓茹;边晓慧;赵自霞;于锐;张永哲;王艳秋;;单独应用血管紧张素转换酶抑制剂或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂治疗特发性膜性肾病患者的预后及其影响因素分析[J];中国医药;2019年01期
2 雷根平;朱开然;胡蓝方;余德惠;;特发性膜性肾病的现代医学治疗进展及中医辨证论治现状[J];陕西中医药大学学报;2019年01期
3 王方;何丹;孙云松;;难治性特发性膜性肾病的中医药诊治进展[J];黑龙江中医药;2017年05期
4 张雪枫;刘庆燕;李德成;;中医方案治疗特发性膜性肾病肾病综合征的研究[J];世界最新医学信息文摘;2018年02期
5 韦翠美;何永成;李彤;刘洪萍;胡豪飞;;浅谈特发性膜性肾病[J];中国中西医结合肾病杂志;2017年12期
6 钟玲玲;旷晖;;膜性肾病病理特点分析[J];现代医学与健康研究电子杂志;2018年09期
7 曹梦颖;尹忠诚;;特发性膜性肾病的研究进展[J];中国中西医结合肾病杂志;2018年06期
8 吴成态;丁秀;王小琴;;特发性膜性肾病发病机制的研究进展[J];临床肾脏病杂志;2018年08期
9 郭海艳;李倩;甄军晖;孙书珍;;儿童特发性膜性肾病的临床病理特点及治疗转归(附22例报告)[J];中国实用儿科杂志;2018年11期
10 鲁珍珍;陈万佳;刘旺意;向玲;李雪玲;蔡秀峰;邓跃毅;;邓跃毅教授治疗特发性膜性肾病的经验撷要[J];中国中西医结合肾病杂志;2018年10期
11 张晓龙;张翠欣;李丹;;特发性膜性肾病药物治疗新进展[J];临床合理用药杂志;2017年01期
12 王朋飞;;环磷酰胺联合小剂量醋酸泼尼松治疗特发性膜性肾病疗效和安全性[J];疾病监测与控制;2017年03期
13 贺巧艳;杨小娟;;免疫抑制剂在特发性膜性肾病中的研究进展[J];世界最新医学信息文摘;2016年90期
14 任松;李贵森;;特发性膜性肾病的发病机制研究[J];实用医院临床杂志;2017年02期
15 郑亚丽;玄先法;王玉新;张以勤;朱璇;吕天羽;颜建华;;膜性肾病患者足细胞表型的改变及意义[J];实用心脑肺血管病杂志;2016年S1期
16 武翠玲;;特发性膜性肾病与乙肝病毒相关性肾炎的病理特点比较[J];临床合理用药杂志;2017年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李交;邓跃毅;;邓跃毅教授治疗家族性膜性肾病临床经验[A];中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编[C];2018年
2 李颖霞;王小琴;吴文静;;王小琴教授辨治特发性膜性肾病经验浅析[A];中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编[C];2018年
3 安玲;胡文博;;西宁地区膜性肾病的临床及病理特点分析[A];中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编[C];2018年
4 李羿;赵洪雯;;成人特发性膜性肾病30例临床特点及病理分析[A];中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编[C];2018年
5 李小伟;梅冬冬;;79例特发性膜性肾病短期临床疗效观察[A];中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编[C];2018年
6 程桂雪;李永哲;秦晓松;;特发性膜性肾病相关自身抗体研究进展[A];第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2016年
7 李伟;;特发性膜性肾病肾病综合症的中西医结合治疗[A];2016年中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会学术年会专题讲座摘要[C];2016年
8 孙宝欣;;蛋白酶活化受体-1在特发性膜性肾病血栓形成中的相关研究[A];2016年中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会学术年会论文摘要汇编[C];2016年
9 董燕飞;吴滢;;儿童膜性肾病25例临床特点及预后分析[A];第十三届江浙沪儿科学术会议暨2016年浙江省医学会儿科学学术年会论文汇编[C];2016年
10 王伟铭;;膜性肾病的诊断及治疗[A];2015年浙江省肾脏病学术论坛暨基层巡讲讲义[C];2015年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑栓;特发性膜性肾病流行病学及其新型生物标志物探索[D];郑州大学;2018年
2 黄利伟;Heymann肾炎蛋白尿的发生机制[D];中国协和医科大学;1999年
3 罗娜;特发性膜性肾病诊断及预后相关指标的研究[D];北京协和医学院;2012年
4 李茜;难治性膜性肾病中医证候、临床病理特点及“去菀陈莝”法治疗的临床研究[D];中国中医科学院;2017年
5 胡迎春;早期特发性膜性肾病患者激素敏感性相关因素及其相关机制的研究[D];山东大学;2015年
6 高琛妮;特发性膜性肾病的临床病理特征和诊治研究[D];上海交通大学;2014年
7 左科;雷公藤治疗膜性肾病的随机对照试验及PLA2R抗体在治疗中的意义研究[D];南京大学;2012年
8 陈意志;成人特发性膜性肾病的预后分析及免疫抑制治疗的荟萃分析[D];中国人民解放军医学院;2013年
9 曾莉;原发性肾病综合征基因多态性与激素敏感性和中医证型的关联研究[D];广州中医药大学;2011年
10 谢璇;特发性膜性肾病证素探讨及补气健脾益肾法治疗膜性肾病大鼠实验研究[D];北京中医药大学;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 姜敏;多靶点免疫抑制治疗特发性膜性肾病的临床研究[D];兰州大学;2015年
2 高玉;肾组织PLA2R的表达在诊断特发性膜性肾病中的作用及其与中医证型相关性的研究[D];广西中医药大学;2018年
3 郭传琦;益气祛湿化瘀方治疗特发性膜性肾病临床观察[D];黑龙江中医药大学;2018年
4 刘艳鑫;牵牛子及其化学拆分组分对大鼠膜性肾病的药理作用研究[D];黑龙江中医药大学;2015年
5 臧倩男;益肾通络方对膜性肾病大鼠肾保护作用及对Ezrin和Synaptopodin蛋白表达的影响[D];河北医科大学;2018年
6 张文贤;血清PLA2R抗体及THSD7A抗体检测在特发性膜性肾病中的临床意义[D];河北医科大学;2018年
7 钱玉珺;膜性肾病合并2型糖尿病的临床病理分析[D];南京大学;2016年
8 向祖菲;探索中老年2型糖尿病合并膜性肾病临床预测指标[D];广西医科大学;2018年
9 王馨;自身免疫性疾病相关性膜性肾病的临床及病理特点分析[D];吉林大学;2018年
10 樊舒蕾;PLA2R、HLA-DQA1基因多态性与四川地区特发性膜性肾病的关联研究[D];川北医学院;2018年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 中国中医科学院西苑医院 肾病科 聂莉芳;有些膜性肾病 单用中药能缓解[N];健康报;2015年
2 记者 刘海英;两个与特发性膜性肾病相关基因被发现[N];科技日报;2011年
3 整理 朱永基 高铭华;肾病研究 转化医学助推临床[N];健康报;2012年
4 彭建中;元气学说的临床应用[N];中国中医药报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978