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愈伤组织和冠瘿培养生物合成苦皮素A

傅经国  
【摘要】: 苦皮藤系卫矛科(Celastraceae)南蛇藤属(Celastrus L.)落叶藤状灌 木植物。我们从该植物中分离鉴定了三个β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇 酯类化合物,分别为:①1β,2β-二乙酰氧基,8α,12-二异丁酰氧 基,4α,6α-二羟基,9β-苯甲酰氧基-β-二氢沉香呋喃(苦皮素A); ②1β,6α,8β-三乙酰氧基,2β,12-二异丁酰氧基,4α-羟基,9 α-呋喃酰氧基-β-二氢沉香呋喃(苦皮素B);③1β,6α,8β-三乙 酰氧基,2β,12-二异丁酰氧基,4α-羟基,9α-苯甲酰氧基-β-二氢 沉香呋喃(苦皮素C)。 利用苦皮藤叶片作为外植体,在含2,4-D的MS培养基上诱导出 了愈伤组织。从愈伤组织中经分离鉴定得到了苦皮素A,并建立了组 织(细胞)培养物中苦皮素A的RP-HPLC含量测定方法。通过碳源 (蔗糖)、大量元素(硫酸镁、硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、氯化钙)、 微量元素(硼酸、硫酸锌、硫酸铜、钼酸钠、硫酸亚铁、碘化钾)、微 生素(盐酸硫胺、烟酸、肌醇)、植物生长调节物质(PGR)以及光照、温 度、培养时间等外部条件对愈伤组织生长和目标产物苦皮素A产率的 影响,选择了最佳培养条件。愈伤组织经继代培养后,初步进行了细 胞悬浮培养试验。 通过C_(58)根癌农杆菌介导转化苦皮藤的适当外植体,获得了两个 转基因的冠瘿组织细胞系,经RP-HPLC法检测,均含有较高含量的 中 文摘要 苦皮素A。 杀虫活性的检测表明:两种来源的苦皮素A(一个从原植物分离纯 化得到;一个是愈伤组织培养法生物合成)对蚜虫的杀虫活性在 90%*00mg/L)以上,对粘虫的杀虫活性在 70o/of500mg/L)以上。配制 成含 1%苦皮素 A乳油的急性毒性实验表明:对大鼠急性经口染毒 LDs。 为 1756.gmg/kg,急性经皮染毒 LD。。大于 10000mg/kg,属于低毒农药; 对家兔急性眼刺激实验眼粘膜刺激眼损伤最高积分为17,属轻度至中 度刺激性农药;对家兔的急性皮肤刺激试验平均积分为1.7,属轻度 刺激性农药。


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