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bFGF.VEGF和TNF-α在脑出血灶周围脑组织表达的实验研究

吴荣欣  
【摘要】: 脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是神经系统多发病,其死亡率和致残率均较高。究其原因,不仅与出血灶对脑组织的压迫致使颅内压增高有关,而且出血后继发性损害,引起周围脑组织的缺血和水肿,进而导致该部位组织细胞生物化学的变化更具有重要意义。细胞因子(cytokine)是具有多种生物学功能、能特异作用于组织细胞的一类因子。实验研究表明碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)参与了缺血脑组织的病理过程。利用分子生物学技术研究出血后周围脑组织细胞因子的变化,有助于阐明出血后脑组织继发性损害的发病机制。本实验应用免疫组织 2L====-a.----...------.triallereforare 化学肥技术,观察肿w、VEGF和 IWhJ在实验性脑出血灶周 围脑组织的变化,以探讨脑出血继发性损害的病理生化变化。 材料与方法:()健康大耳白家兔40只,随机分为4组。A 组10只为正常对照组;另三组各10只为实验组,其中B组为出血 后1大组,C组为出血后3天组,D组为出血后7天组。采用自体 血注射法制作脑出血模型。于右侧中线旁 0石cm,冠状缝前 0.Icm 处细孔钻钻颅,自制脑穿刺针自脑皮质向右下方呈45‘角刺入,穿 刺深度1.3d.4cm,首次注入血0.Zml,30分钟后再注入0.4ml。脑 穿针留置30分钟后拔出,以防未凝血自穿刺孔处溢出。Q)实验 组分别于 1、3、7天将兔断头处死,再行 10%中性甲醛颈动脉灌注, 将出血周围脑组织取出,常规石蜡包埋,切片厚度4urn,,以兔疫 组化染色。u)采用兔疫组化SP法,分别检测bFGF、VEGF和 ’’m--口在出血灶周围脑组织的表达水平。门)应用国际通用统计 分析七AS6.12软件进行数据处理。统计学方法采用方差分析及 q 检验和丫检验,显著性水准a=0刀5。 结果:门)脑出血实验组动物均出现精神不振、少食、自洁能 力差、被毛粗乱、体重减轻等表现,有的还出现踱行,左前肢肌力 明显减退。Q)正常对照组脑组织神经细胞、胶质细胞和血管内皮 细胞bFGF、VEGF、TN’F-a表达水平均较低,而各实验组表达明 2 一 显增高。bFGF阳性表达的细胞均数分别为:A组8石0 L 0.99 B 组15.04*1.4引C组29.SZ L 2.03;D组18.56LI.36。各实验组与 正常对照组及各实验组间比较的差异均具有显著性中<0刀5人B 组最低,C组最高。VEGF阳性表达的细胞均数分别为:A组3.02 10.82;B组 6.38 ti02;C组 11.26*5 D组 18.64 LI.58。各 实验组与正常对照组及各实验组间比较的差异均具有显著性 一功刀5人B组最低,D组最高。’v’vr’-a阳性表达的细胞均数分 别为:A组5.44LI*7 B组31.78L2.30;C组16.48*2.10;D 组10.35 ti.50。各实验组与正常对照组及各实验组间比较的差异 均具有显著性中叼刀引。D组最低,B组最高。 结论:()本研究采用兔自体血注射法制作的脑出血模型比较 理想。克服了大鼠等小型动物制作设备及条件的限制,同时避免了 大型动物如猪、犬等成本高、饲养要求高的缺点。采用二次注射法 U illjection)可有效的避免自体血从穿刺针孔处溢出,操作 简单、准确可靠。*)各实验组与正常对照组比较,bFGF、VEGF。 TNF-口阳性表达细胞数均明显增多,具有显著性差异。表明出血 损害使周围脑组织发生明显的细胞生物化学变化,该变化既是细胞 组织损伤的表现,同时又可能是病变神经组织修复的分子生物学表 现。Q)各实验组组间比较旺GF、VEGF、TNF-口阳性表达细胞 3 ———— 数的差异均具有显著性,表明它们在脑出血后的表达水乎随时间的 不同而发生变化。该变化在一定程度上反映了周围脑组织的损伤程 度。O)本研究为脑出血继发性损害的病理生化变化以及脑出血的 防治研究从分子生物学角度提供了理论依据。


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