收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

新生大鼠海马齿状回神经干细胞的鉴定、分化及GM-CSF mRNA的表达

刘廷磊  
【摘要】: 神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞能力的、能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。一般而言,神经干细胞至少具备3种特性:(1)缺乏神经系统分化的标志,如神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、波形纤维蛋白(Vimentin)。同时表达神经干细胞标志性蛋白-神经巢蛋白(nestin);(2)自我更新能力;(3)多潜能性,即能分化成神经系统的各种细胞。神经干细胞的分离和培养为神经系统的神经性疾病的治疗提供了诱人的前景,利用细胞培养技术分离神经干细胞成为近年脑科学研究的热点之一。目前,人们已能从脐血、胚胎或成年动物的部分脑区(室下区、纹状体)分离培养出多潜能神经干细胞。但成年大鼠脑内神经干细胞数量有限,胚胎脑神经干细胞分离步骤繁琐。能否从新生大鼠海马齿状回分离、培养神经干细胞,国内外尚未见报道。 已有研究表明,某些细胞因子与神经干细胞增殖、分化有关,能影响神经干细胞分化的整个过程。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)广泛存在于造血系统、免疫系统和神经系统,能调节多种细胞的分化增殖。体外研究表明GM-CSF能明显提高神经元的存活率,降低凋亡率,但其对神经干细胞的作用及机制,现尚不清楚。 郑州人学L艺()(j3)研少〔’l毕刊l·L仑文 新沪}_友鼠海’今沐.状回神经卜细胞鉴走、分化及6翎比「砍、乃的农达 方法1本实验采用免疫组化技术观察出生Id的大鼠海马齿状回nostin表达。 采用神经球连续形成法从新生大鼠海马齿状回分离、培养神经干细胞,通过连续 传代培养观察其自我更新能力。采用神经干细胞nestin细胞免疫化学染色,鉴定 所分离的细胞是否为神经干细胞。 2采用MTT比色法测定细胞的光密度值(0D值),每24h测定1次,从细胞接种到 神经球形成连续测定sd,绘制细胞增殖活性曲线。 3将BrdU加入传代后的单细胞悬液中,培养7d,收集新形成的神经球,行BrdU 细胞免疫化学检测。 4将传代培养的神经球离心收集,转移至24孔培养板,随机分为3组,每组24 孔细胞,置5%COZ、370C培养箱,连续培养7d,观察神经球的诱导分化。I组: DMEM压12(1:1)培养液的神经球,含10%小牛血清;11组:DMEM川12(1:1)培养液 的神经球,含10%小牛血清、100n留mlGM一CSF;111组:DMEM/F 12(1:1)培养液的 神经球,含100n乡mlGM一CSF。连续培养7d后,分别行NSE、GFAP细胞免疫化学 染色,对组间差异进行统计学处理。 5应用原位杂交技术观察神经一干细胞GM一CSF mRNA表达。 所有数据以均值士标准差(又,、)表示,并进行统计学处理。 结果l新生大鼠海马本部及齿状回均可见较多ne、tin阳性细胞。新生大鼠海马 齿状回分离的单个细胞通过传代培养,可形成神经球。 2 BrdU孵育5一了d后,新形成的神经球BrdU免疫标记阳性。连续测定0D值显示 培养第3d略有下降,之后,连续增高,8d后仍保持较高水平。 3细胞免疫化学染色发现,神经千细胞标记蛋白nestin在原代及传代神经球均有 表达,而NSE、GFAP在原代、传代神经球均未见表达。诱导分化7d后,完全分化 及未分化完全的细胞分别表达NSE、G队尸,而nesti。表达阴性。 4撤除有丝分裂原,I组和H组传代培养神经球可形成有l一2长突起神经元样细 郑州,学山()1、研宜’尸知{沱文 析‘},、{谈.下:‘少l上二伏卜,}神经}红}{胞鉴上、分化及屯卜\1(’苏1了:,l权\八l勺衷达 胞或有多个粗长突起的星形胶质样细胞。细胞免疫化学方法,可分别显示出 NSE,GFAP免疫阳性细胞,l组内表达GFAP、NSE阳性细胞所占总细胞数的比例分 别为62.8%、1 3.5%;H组内表达GFAP、略E阳性细胞所占总细胞数的比例分别 为69.8%、25.9%;所有分化细胞nestin检测均为阴性。 5神经干细胞可表达GM一CSFmRNA,原位杂交阳性信号为胞浆着色,呈黄色或棕黄 色颗粒状,胞核内未见着色,且nestin染色阳性。PBS替代杂交液组的细胞未见 GM一CSFmRNA阳性信号。 结论l自新生大鼠海马齿状回能够分离、培养出神经干细胞。 2培养的神经干细胞具有连续增殖的能力。 3神经干细胞在一定条件下可分化为神经元和胶质细胞。 4神经干细胞可表达GM一CSF mRNA,与神经干细胞的分化调节有关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 姚忠祥,秦茂林,李巍,张吉强,蔡文琴;胚胎干细胞与神经干细胞的神经分化[J];四川解剖学杂志;2001年01期
2 孟晓婷,陈东;神经干细胞的分离及体外扩增研究进展[J];吉林大学学报(医学版);2002年06期
3 李敏杰,刘勇,吕海侠,丁海燕,赵顺西;新生大鼠神经干细胞的分离培养与观察[J];细胞与分子免疫学杂志;2002年04期
4 ;日发现神经干细胞脑内移动机制[J];中国科技信息;2010年19期
5 李方正,尹逊河,王翠梅,臧福学;哺乳动物神经干细胞研究进展[J];山东畜牧兽医;2004年02期
6 杨忠旭,栾国明,万虹,历俊华;稳定增殖神经干细胞的实验研究[J];中国微侵袭神经外科杂志;2004年03期
7 唐勇,刘洁,陈瑾,余曙光;内源性神经干细胞的研究与进展[J];中国临床康复;2005年09期
8 陈锐,刘娣,张济;神经干细胞的研究进展及基因芯片技术的应用[J];生命科学;2005年03期
9 张燕,梁元晶;胚胎和成体神经干细胞分化机制的研究[J];生物学通报;2005年02期
10 张树庸;;神经干细胞有望助脑瘤患者修复认知[J];实验动物科学;2011年04期
11 谷平,陈付学,文铁桥;一些神经营养因子对神经干细胞的增殖和分化的影响[J];上海大学学报(自然科学版);2001年02期
12 黄镇,金国华,徐慧君;神经干细胞研究进展[J];解剖科学进展;2002年01期
13 李钢;神经干细胞的来源[J];中华神经医学杂志;2003年05期
14 李怡,娄淑杰,路长林;神经干细胞分化研究进展[J];中国神经科学杂志;2001年03期
15 过七根,陈付学,宋红生,庞淑亚,文铁桥;成体小鼠骨髓中神经干细胞的分离与培养[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2003年06期
16 段建钢,王凡,陈道邦,陈红,项涛;大鼠神经干细胞的分离培养、鉴定和诱导分化[J];解剖学杂志;2004年02期
17 吴星,张沛云,罗莉,徐昌芬;胚胎大鼠海马神经干细胞分离培养和分化[J];南京医科大学学报(自然科学版);2004年02期
18 李赫冬;;人为什么聪明——“悬空”放射状胶质神经干细胞的发现[J];中国细胞生物学学报;2011年01期
19 林秋霞!100850北京,刘少君!100850北京;中枢神经系统干细胞的研究进展[J];中华医学杂志;2001年02期
20 谢瑶,何宏文;用组织块法培养成年和老年鼠神经干细胞[J];解剖学研究;2001年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙一睿;胡锦;王尔松;奚才华;姚海军;;单层黏附培养技术在哺乳动物神经干细胞体外稳定增殖和多向分化中的应用[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
2 李力;万琪;刘永红;张巍;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
3 田东萍;苏敏;吴贤英;张舸;;硒、B-27在神经干细胞球存活与分化中的作用[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
4 杨华静;徐鹏;张苏明;;低浓度β-淀粉样蛋白对神经干细胞的作用机制研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
5 文玉军;王登科;孙征;刘海洋;张莲香;秦毅;;成年和老年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞的变化[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
6 张波;王任直;;脑梗死后神经干细胞原位增殖及其机理的实验研究[A];中国微循环学会第五届中国微循环学术大会论文摘要汇编[C];2004年
7 邢雪松;吕威力;;Wnt-1在大鼠脑缺血再灌注海马组织内源性神经干细胞早期增殖分化中的作用[A];创新沈阳文集(B)[C];2009年
8 朱慧;李晓红;戚菁;施维;吴信华;陆玉华;鞠少卿;刘炎;;Pax3负性调控神经干细胞分化过程中胶质纤维酸性蛋白的表达[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年
9 李革飞;李剑平;;应用流式细胞术检测神经干细胞表面标志物-Nestin[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
10 姚立松;刘天庆;葛丹;崔占峰;马学虎;;海藻酸钙微胶珠培养神经干细胞[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑敏;神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
2 卢洪流;成年大鼠脑内神经干细胞的在体研究[D];第二军医大学;2001年
3 李巍;神经干细胞的分化调控及BDNF基因修饰后对大鼠脊髓损伤修复的研究[D];第三军医大学;2002年
4 张力;人胚神经干细胞及骨髓基质细胞移植治疗帕金森病恒河猴模型的实验研究[D];复旦大学;2003年
5 戴宜武;骨髓基质细胞定向分化为神经干细胞及自体移植治疗中脑损伤研究[D];第一军医大学;2002年
6 张所军;神经干细胞向胶质瘤干细胞迁移及对其生长特性的影响[D];华中科技大学;2011年
7 张在金;神经干细胞移植治疗大鼠脑创伤的实验研究[D];第二军医大学;2005年
8 尹丰;人视网膜色素上皮细胞治疗帕金森病的实验与临床研究[D];第二军医大学;2006年
9 谭太贵;多通道PLGA脊髓再生介导管道治疗大鼠脊髓半横断损伤[D];天津医科大学;2006年
10 高国一;胎鼠脑神经干细胞鉴定纯化与生物学特性观察[D];第二军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冯年花;人诱导性多能干细胞向神经干细胞分化的实验研究[D];南昌大学;2010年
2 宋精梅;比较新生大鼠脑部不同部位的神经干细胞被诱导分化为少突胶质细胞的差异[D];福建医科大学;2010年
3 李政;内皮祖细胞调控神经干细胞分化及其机制研究[D];第三军医大学;2010年
4 王念;绞股蓝皂苷对脊髓源神经干细胞体外培养的影响[D];陕西师范大学;2011年
5 刘朋;海藻酸钙/明胶微胶珠的制备及在神经干细胞培养中的应用[D];大连理工大学;2011年
6 郭兵;大鼠羊膜上皮细胞体外向类神经干细胞诱导分化及其移植后对视神经再生的作用[D];第二军医大学;2010年
7 吴珲;神经干细胞玻璃化冻存及其生物学特性的研究[D];大连理工大学;2011年
8 王培福;大鼠神经干细胞的培养和鉴定[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
9 刘孟宇;胶质瘤细胞条件培养基对神经干细胞迁移的影响[D];苏州大学;2010年
10 朱爱萍;重复经颅磁刺激对帕金森病模型小鼠体内神经干细胞增殖的影响[D];河北医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 孙国根;神经干细胞并非“全能制造者”[N];中国医药报;2009年
2 时仲省 高思敏;移植神经干细胞 瘫痪兔子可爬行[N];大众卫生报;2001年
3 王成应;能克隆的神经干细胞被分离[N];健康报;2004年
4 刘海英;脑癌源于脑下室区的神经干细胞[N];科技日报;2009年
5 孙国根 白毅;灵长类脑内神经干细胞被发现[N];中国医药报;2011年
6 北京康复中心神经外科 黄红云;神经干细胞之谜[N];健康报;2008年
7 刘霞;美将成人皮肤细胞变成神经干细胞[N];科技日报;2011年
8 沈丽 付钰;神奇的神经干细胞[N];科技日报;2002年
9 记者 吴苡婷;为脑损伤患者治疗打开希望之门[N];上海科技报;2009年
10 刘霞;美培育出能自我更新的神经干细胞[N];科技日报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978