人骨肉瘤中P27kip1、CyclinE和ki-67的表达研究

【摘要】： 骨肉瘤(Osteosarcoma，OS)是骨组织的一种最常见的原发性恶性肿瘤，好发于青少年，常早期出现血行转移，五年生存率低，严重危害着患者的生命和健康。目前骨肉瘤的病因和发病机制仍不清楚。研究细胞周期调控，确立调控进程分子机制，很可能会阐明致癌机制，开辟新的治疗途径。P27kiP1是新发现的一个重要的CKI(cyclin-dependent kinase inhibitor,CKI)分子，它通过对CDK(cyclin-dependent kinase)活性的抑制，从而对细胞周期进行负调控。cyclinE属于G_1期的正调节因子，结合并激活CDK，启动DNA合成，从而实现G_1/S期转化。肿瘤细胞的增殖率是决定肿瘤生物学行为的一个重要参数，ki-67是研究细胞增殖状态的较好指标。目前关于P27kiP1、cyclinE和ki-67基因在人骨肉瘤中联合表达的研究，国内外还尚未见报道。本研究选取30例人骨肉瘤标本，按刘昌茂分级法分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，其中Ⅰ级7例，Ⅱ级14例，Ⅲ级9例。10例骨软骨瘤作为对照。采用免疫组化S-P法，探讨了P27kip1、cyclinE及ki-67基因在人骨肉瘤中表达的生物学意义和相互关系。 结果显示： 1．P27蛋白表达：(1)骨软骨瘤组的阳性表达率为80％(8/10)，其中弱阳性2例，中度阳性3例，强阳性3例；骨肉瘤组的阳性表达率为33.33％(10/30)，其中弱阳性7例，中度阳性2例，强阳性1例。比较两组的染色阳性率和染色强度，差异均有显著性(P＜0.05)。(2)骨肉瘤Ⅰ级组阳性表达率为71.43％(5/7)，其中弱阳性3例，中度阳性1例，强阳性1例；骨肉瘤Ⅱ、Ⅲ级组的阳性表达率为21.74％(5/23)，其中弱阳性4例，中度阳性1例。比较骨肉瘤Ⅰ级组与Ⅱ、Ⅲ 郑州大学2003届硕士学位论文 人骨肉瘤中P27kiPI、eyelinE和ki一67的表达研究 级组染色阳性率和染色强度，差异均有显著性(P0.05)。(3)骨母细胞型(I 型)组染色阳性例数为5例，阴性例数9例;软骨母细胞型(2型)组染色阳性 例数为2例，阴性例数为3例;纤维母细胞型(3型)组染色阳性例数为2例， 阴性例数为6例;混合型(4型)组染色阳性例数为1例，阴性例数为2例。比 较骨肉瘤各病理亚型的染色结果，差异无显著性护0.05)。 2.CyclinE蛋白表达:(l)骨软骨瘤组的阳性表达率为30%( 3/10)，其中 弱阳性2例，中度阳性1例;骨肉瘤组的阳性表达率为93.33%(28/30)，其中 弱阳性6例，中度阳性16例，强阳性6例。比较两组的染色阳性率和染色强度， 差异均有高度显著性(P0.01)。(2)骨肉瘤I级组阳性表达率为85.71%(6/7)， 其中弱阳性4例，中度阳性1例，强阳性l例;骨肉瘤n、nl级组的阳性表达率 为95.65%(22/23)，其中弱阳性2例，中度阳性15例，强阳性5例。比较骨肉瘤 I级和n、nl级组染色阳性率，差异无显著性(P0.05)。比较骨肉瘤组I级和 11、111级组染色强度，差异有显著性印叱0.05)。(3)骨母细胞型组染色阳性例 数为13例，阴性例数为1例;软骨母细胞型组染色阳性例数为4例，阴性例数 为1例;纤维母细胞型染色阳性例数为8例，无阴性染色;混合型组染色阳性例 数为3例，无阴性染色。比较骨肉瘤各病理类型的染色结果，差异无显著性 (尸0 .05)。 3.幻一67蛋白表达:(1)骨软骨瘤组的阳性表达率为10%(1/10)，该例为 低表达;骨肉瘤组的阳性表达率为66.67%(20/30)，其中低表达8例，高表达 12例。比较两组的染色阳性和染色强度，差异均有高度显著性(P0.01二;(2) 骨肉瘤I级组阳性表达率为28.57%(2/7)，其中低表达1例，高表达1例;骨 肉瘤11、111级组的阳性表达率为7色26%(18/23)，其中低表达7例，高表达n 例。比较骨肉瘤I级与11、m级组染色阳性率和染色强度，差异均有显著性 (P0.05)。(3)骨母细胞型染色阳性例数为10例，阴性例数为4例;软骨母细 胞型组染色阳性例数为3例，阴性例数为2例;纤维母细胞型组染色阳性例数为 6例，阴性例数为2例;混合型组染色阳性例数为1例，阴性例数为2例。比较 骨肉瘤各病理类型的染色结果，差异无显著性护0.05)。 4.骨肉瘤中P27，cychnE与ki一67三者蛋白表达强度之间用spe~皿等级 相关分析显示，P27蛋白表达强度与cyclinE蛋白表达强度之间呈显著负相关(rs= 郑州大学2003届硕士学位论文 人骨肉瘤中p27kipl、卿clinE和ki一67的表达研究 一0.432，P0.05);P27蛋白表达强度与ki一67表达强度之间相关无显著性(rs二一 0.34，P0.05);cyclinE蛋白表达强度与ki一67蛋白表达强度之间呈显著正相关 (rs=0 .641，P0.ol)。 小结:1.骨肉瘤组比骨软骨瘤组中P27蛋白阳性表达率及强度均降低 (尸0.05)，且P27蛋白的阳性表达强度与骨肉瘤的恶性程度相关联，恶性程度 越高，表达越弱，提示P27蛋白与骨肉瘤的发生发展密切相关，可以作为判断骨 肉瘤分级的指标。 2.骨肉瘤组比骨软骨瘤组cydinE蛋白阳性表达率显著增高(尸0.05)，提 示骨肉瘤的发生与cycllnE蛋白过表达有关。 3.骨肉瘤的恶性程度与ki一67的阳性表达率和表达强度相关联，恶性程度 越高，增殖活性越强，表明ki一67的阳性表达率和表达程度是判断骨肉瘤恶性程 度的一个指标。 4.骨肉瘤中P27蛋白和cyclinE蛋白表达强度呈显著负相关(rs=一 0.4