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溶解红细胞对脑出血后脑水肿的影响

李慧  
【摘要】: 脑出血(Intracerebral hemorrhage)是神经系统多发病之一,病情重、致残、致死率高,究其原因,与血肿周围脑组织水肿密切相关。长期以来,学者们认为血肿本身的占位,血肿对周围组织的机械压迫等是出血后脑水肿形成的根本原因,并在临床采取了针对性的治疗措施,但均不能解释其真正机理和取得满意的治疗效果。现在很多实验都证实,ICH引起的脑水肿,主要由血肿自身释放的各种生化物质引起的,如凝血酶,血红蛋白及浸润的炎性因子等。临床观察发现,脑出血后72小时存在着脑水肿的高峰,可能与红细胞此时的溶解释放的血红蛋白有关。而且,血红蛋白被血红素环解加氧酶(HO-1)分解后也能造成脑损伤,从而使血红蛋白的作用与脑水肿之间联系起来。但溶解红细胞致脑水肿的具体机制国内外研究还较少。本实验利用立体定向注射的方法制作大鼠脑出血模型,在大鼠基底节注入溶解红细胞,通过脑含水量的变化和伊文斯兰含量的变化估计脑水肿程度和血脑屏障破坏程度,用常规病理技术观察血肿周围病理变化,用免疫组化技术观察HO-1的表达以估计血肿周围氧化损伤程度,用末端脱氧核苷酰转移酶法,即TUNEL法(TdT-mediated biotinylated-dUTP nick end labeling method)观察血肿周围细胞凋亡程度,这些有助于阐明脑出血后血红蛋白的脑水肿的作用机制,为临床治疗脑出血后脑水肿提供理论依据。 材料与方法 健康wistar大鼠48只,随机分为3组,每组16只,A:生理盐水组;B:自体全血组;C:溶解红细胞组(血红蛋白)组。采用立体定向注射方法,用微量注射器在右侧尾状核部位,注入A:生理盐水;B:自体全血;C:溶解红细胞组(血红蛋白)各50ul,其中,血脑屏障通透性观察的各组在注射完毕后,自舌静脉给予浓度为2.5%的伊文斯兰溶液(0.2ml/100g),(1)脑含水量,伊文斯兰含量测定的各组于术后第24h,断头处死,取右侧大脑半球,自针道及 郑州大学2003年硕十毕业论文 溶解红细胞对脑出血后脑水肿的影响 其前后各1.Slnln处冠状切取两块脑组织。前部脑组织块称取湿重后,浸于3ml 甲酞胺溶液中并置于45℃温箱中3天,取萃取液用紫外分光光度仪进行比色, 针道后部脑组织块称湿重后,置110℃烘箱内24h再称其干量,干湿重之差除 以湿重即为脑含水量。(2)免疫组化观察组及凋亡观察组于术后24小时,处 死取脑,常规石蜡包埋,切片,片厚3um,采用HE染色及免疫组化SABC法及 Tunel法,分别检测HO一1阳性表达细胞数及凋亡细胞数。(3)应用SPSSIO.O 统计软件进行数据处理,统计方法采用单因素方差分析与秩和检验并进行两两 比较,以a二0.05作为检验水准。 结果 1、大鼠行为变化:大鼠均出现精神萎糜,自洁能力差,拒食,平衡能力下 降,左侧肢体肌力下降并出现旋转,跋行等行为表现,并有大鼠出现惊厥反应。 其中A组虽有上述症状,术后2一3天多恢复正常,B、C组症状持续加重,甚至 死亡。 2、脑含水量测定(%):A:生理盐水组77.巧士1.55;B:自体全血组81.24 士1.32;C:溶解红细胞组(血红蛋白)82.23士1.84;B组脑含水高于A组 (PO.05);说明注入自体全血能产生脑水肿。C组脑含水高于A组(P0.05);说 明注入溶解红细胞组(血红蛋白)能产生脑水肿。B,C两组间差异无显著性 (P0.05);说明注入自体全血和溶解红细胞都能产生脑水肿,且水肿程度相 差不大。 3、伊文斯兰含量测定(ug/g):A:生理盐水组4.43士0.86;B:自体全 血组n.76士1.巧;C:溶解红细胞组(血红蛋白)13.86士1.38;B组脑伊文斯 兰含量高于A组(P0 .05);说明注入自体全血能造成血脑屏障通透性的增加,C 组脑伊文斯兰含量高于A组(P0 .05);说明注入溶解红细胞组(血红蛋白)能造 成血脑屏障通透性的增加,B,C两组间差异有显著性(P0.05);说明溶解红 细胞对血脑屏障通透性的增加程度大于自体全血。 4、HO一1染色阳性细胞数的变化:A:生理盐水组0.38士0.52;B:自体全 血组9.75士2.83:C:溶解红细胞组(血红蛋白)17.88士5.30;B组脑HO一1染 色阳性细胞数高于A组(P0.05):说明注入自体全血能诱导HO一1表达,造成脑 组织过氧化损伤,C组脑HO一l染色阳性细胞数高于A组(P0 .05);说明注入溶 解红细胞能诱导HO一1表达,造成脑组织过氧化损伤,B,C两组间差异有显著性 (PO.05);说明溶解红细胞对脑组织过氧化损伤程度大于自体全血。 郑州大学2003年硕十毕业论文 溶解红细胞对脑出血后脑水肿的影响 5、凋亡染色阳性细胞数的变化:A:生理盐水组0.125士0.35;B:自体 全血组4.375士0.92;C:溶解红细胞组(血红蛋白)9.375士2.00;B组脑Tunel 染色阳性细胞数高于A组(P0.05);说明注入自体全血能诱导凋亡机制的产生, C组脑Tunel染色阳性细胞数高于A组(P0 .05);说明注入溶解红细胞能诱导 诱导凋亡机制的产生,B,C两组间差异有显著性(P0.05);说明溶解红细胞 诱导凋亡机制对脑组织的损伤程度大于自体全血。 6、HE染色观察:C组可见脑组织破坏,组织结构紊乱,神经细胞高度水肿, 碎裂,正常组织结构被破坏。B组变化较C组轻,A组未见明显变化。 结论 1、采用自体血立体定向注射?


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