β-catenin、PKCβⅡ与大肠癌发生发展关系的研究

【摘要】： 背景和目的： 大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展是多基因、多步骤的过程，涉及多种原癌基因的激活和抑癌基因的失活。复发与转移是近年来大肠癌患者治疗效果无明显改善的主要原因。探讨大肠癌发生发展机制对指导大肠癌的临床诊治、改善患者预后有十分重要的意义。β-连环素基因(β-catenin，CTNNB1)是一种新的原癌基因，其表达产物β-catenin蛋白在细胞粘附和Wnt信号传导通路中起极其重要的作用，参与多种肿瘤的发生发展过程，并与肿瘤的浸润转移密切相关；蛋白激酶Cβ Ⅱ(Protein kinase Cβ Ⅱ，PKCβ Ⅱ)是一种磷脂依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶，在细胞的生长、分化及凋亡等过程中起重要的调控作用。最近研究发现PKCβ Ⅱ在大肠癌中的表达异常增高，PKCβ Ⅱ表达对β-catenin的调节机制及β-catenin与大肠癌的关系目前尚不完全明了，有关PKCβ Ⅱ与大肠癌临床病理特征的报道亦甚少；β-catenin与大肠癌的关系也未明确。本研究运用免疫组化方法，探讨β-catenin和PKCβ Ⅱ在大肠癌发生发展中的作用及它们之间的关系，旨在阐明大肠癌发生发展的可能机制，从而为大肠癌的治疗提供理论依据。 材料和方法： 选取1996-1999年郑州大学第一附属医院大肠癌根治性手术切除标本69例，手术切除大肠腺瘤21例，另取距肿瘤边缘大于5cm正常大肠粘膜组织标本16例，所有标本均经病理证实，并经10％中性福尔马林液固定，常规脱水后石 郑州大学2003年硕士论文0－。出＊mn、＊＊C a 11与大肠癌发生发展关系的研究 蜡包埋。应用免疫组织化学 SP（Streptavidin peroxidase）法检测 D叱atenin和 PKC 6 11在大肠正常粘膜组织、大肠腺瘤和大肠癌中的表达。实验数据经 SPSS10刀 统计软件包进行统计学处理，分别采用 4检验、fisher精确概率法及 Spearman 相关分析，以a—0．05为显著性检验水准。 结果： 1．p七atenin表达结果：O冲七ateain的正常表达为胞膜表达。异常表达方式 为胞膜减弱表达、胞浆蓄积和胞核异位表达。O川 例正常大肠粘膜上皮组织 D 七atenin均呈胞膜保留表达，着色部位主要位于细胞与细胞之间的粘附部位，染 色呈棕黄色或者棕褐色，阳性率为100％＊。p七atenin在大肠腺瘤和大肠 癌呈现不同程度的异常表达。6七atenin异常表达率在大肠腺瘤为57．14％＊o卜 其中胞膜减弱表达率、胞浆蓄积率及胞核异位率分别为19．05％＊ 卜 57．14％（12／21）、9．52％（2／21）。P－catenin异常表达率在大肠癌为79．71％（55／69）， 其中胞膜减弱表达率、胞浆蓄积率、胞核异位率分别为44．93％o历9X 69．57％（48／69卜34．78o口4／69卜大肠腺瘤和大肠癌组间同部位表达比较，两组间 胞膜减弱表达与胞核异位分别有显著性差异（P＜0刀5），但是胞浆蓄积差异无显 著性（P＞0．05）。大肠腺瘤和大肠癌中 i－catenin异常表达与正常大肠粘膜组织差 异有显著性（P＜0刀5）。（3）69例大肠癌标本按照浸润深度分为浸润不超过肌层 组和浸润超过肌层至外膜或超过外膜两组，i．catenin在两组的异常表达率随浸 润深度增加呈一定增高趋势，两组间胞膜减弱表达、胞浆蓄积及胞核异位两两比 较均差异有显著性（P＜0刀5）。（4）按照有无淋巴结转移将69例大肠癌分为有淋 巴结转移组和无淋巴结转移组。在有淋巴结转移组，6．catenin胞膜减弱表达率、 胞浆蓄积率和胞核异位率分别为的j2％口o卜83．87％oUnX54．84％Ov1h ．无淋巴结转移组中，D－catenin胞膜减弱表达率、胞浆蓄积率和胞核异位率分别 为28．95o（if／38）、57．89％（2／38）、18．42％（7／38），组间比较差异有显著性（P＜0．05）。 G）按照DukeS分期将大肠癌组分为A、B、C、D四期，各期间组间同型异常 表达比较，胞膜减弱表达和胞浆蓄积均表现为：A期与C＋D期、B期与C＋D期 间差异有显著性（P＜0．05）；A期与B期差异无显著性（P＞0刀5）。胞核异位比较， A＋B期与C＋D期之间差异显著（P＜0刀5）。D－catenin异常表达与大肠癌的大体 形态、直径大小及分化程度无关（P＞0刀5）。 2 郑州大学 2003年硕士论文 日－catenn、PKC D 11与大肠癌发生发展关系的研究 2．PKC 6 11表达结果：（）PKC日＊在正常大肠粘膜呈阴性或弱阳性表达。 （2）肿瘤组织中 PKC fi 11阳性染色颗粒主要定位于肿瘤细胞胞浆内，周围间质 亦见少量阳性染色。正常大肠粘膜、大肠腺瘤和大肠癌组织 PKC 6 11阳性表达 率分别为12．5oO用卜28．57o（6／X56．52％（39／69，大肠癌组显著高于正常大 肠粘膜组和大肠腺瘤组（P＜0．05人正常粘膜与大肠腺瘤间差异无显著性卜0．05） 门）PKC511在浸润不超过肌层组和浸润超过肌层至外膜及超过外膜组阳性表 达率分别为60OO 2／20）和67．57op5o7），差异有显著性（P＜0．05人N）有淋巴结 转移组阳性率为 74．19o（20X