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荧光定量PCR检测脆弱类杆菌的研究

卞广林  
【摘要】:目的: 脆弱类杆菌(Bacteria fragilis,Bf)是一种革兰氏阴性无芽孢厌氧杆菌,为临床上重要的条件致病菌,可引起多种感染性疾病。脆弱类杆菌也是人体肠道正常菌群的优势菌,在维持肠道微生态平衡中起着重要的作用。传统的脆弱类杆菌定性定量检测法主要是通过厌氧培养后进行生化鉴定和平板计数,这种方法不但费时费力,而且时常会引起鉴定、计数失误。近年来,国内外出现了以16S rRNA为靶设计引物,通过荧光定量PCR检测细菌的报道。此法具有灵敏度高、特异性强、定量准确等优点。本试验对荧光定量PCR在脆弱类杆菌检测中的应用做初步的研究。 方法: 以脆弱类杆菌标准菌株ATCC 25285 16S rRNA基因序列为靶,设计脆弱类杆菌种特异性引物,分别以脆弱类杆菌ATCC 25285基因组DNA和目标基因为标准品,与已知DNA含量的12株脆弱类杆菌、3株脆弱类杆菌未定株(仅有1项生化反应与脆弱类杆菌不同)和其它7种细菌一起进行荧光定量PCR扩增,对脆弱类杆菌进行鉴定,并与生化鉴定法作比较。利用标准曲线定量脆弱类杆菌DNA的含量,并与实际DNA量做比较,研究荧光定量PCR定量的准确性;对已知含量的脆弱类杆菌DNA进行10倍等比稀释,检测荧光定量PCR的灵敏度。 结果: 1.荧光定量PCR不但能够将12株脆弱类杆菌鉴定出来,而且还可以把3株生化反应不


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