弹性蛋白酶菌株选育及其发酵条件初步研究

【摘要】：本研究从弹性蛋白酶产生菌的选育入手，利用有效的初筛和复筛体系，经过大量的菌种筛选，分离到了一株产弹性蛋白酶较高的菌株EA9，其产酶稳定性试验表明该菌有较好的遗传稳定性。 通过研究菌株的形态学特征和生理生化性能，鉴定该菌株为芽孢杆菌属。利用离子注入和紫外线相结合的复合诱变手段，获得一株突变株EA9314，其产酶水平较原始出发株提高了33％。 利用单因素试验结合Plackett-Burman试验和正交试验，研究了培养基成份对发酵产酶的影响，以及摇瓶培养条件对产酶的影响。从培养基成份的单因素试验结果可知，最佳的碳源、氮源是葡萄糖和酵母粉，最佳的无机盐组合是K_2HPO_4和MgSO_4，少量的豆饼粉对产酶有较大的促进作用；Plackett-Burman试验结果表明培养基成份对产酶的影响先后顺序为：酵母粉＞葡萄糖＞MgSO_4＞K_2HPO_4；正交试验得到了葡萄糖、酵母粉的最适浓度组合。通过以上研究，得到其最佳培养基组成是：2％葡萄糖，1.5％酵母粉，0.1％豆饼粉，0.1％K_2HPO_4，0.01％MgSO_4。摇瓶培养条件的研究表明，最佳培养条件是：培养温度37℃，起始pH6.5—7.0，250ml三角瓶装液量20ml，接种量6％。在优化好的发酵条件下，该菌可达最高产酶水平274.7U／ml。