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弹性蛋白酶菌株选育及其发酵条件初步研究

王利敏  
【摘要】:本研究从弹性蛋白酶产生菌的选育入手,利用有效的初筛和复筛体系,经过大量的菌种筛选,分离到了一株产弹性蛋白酶较高的菌株EA9,其产酶稳定性试验表明该菌有较好的遗传稳定性。 通过研究菌株的形态学特征和生理生化性能,鉴定该菌株为芽孢杆菌属。利用离子注入和紫外线相结合的复合诱变手段,获得一株突变株EA9314,其产酶水平较原始出发株提高了33%。 利用单因素试验结合Plackett-Burman试验和正交试验,研究了培养基成份对发酵产酶的影响,以及摇瓶培养条件对产酶的影响。从培养基成份的单因素试验结果可知,最佳的碳源、氮源是葡萄糖和酵母粉,最佳的无机盐组合是K_2HPO_4和MgSO_4,少量的豆饼粉对产酶有较大的促进作用;Plackett-Burman试验结果表明培养基成份对产酶的影响先后顺序为:酵母粉>葡萄糖>MgSO_4>K_2HPO_4;正交试验得到了葡萄糖、酵母粉的最适浓度组合。通过以上研究,得到其最佳培养基组成是:2%葡萄糖,1.5%酵母粉,0.1%豆饼粉,0.1%K_2HPO_4,0.01%MgSO_4。摇瓶培养条件的研究表明,最佳培养条件是:培养温度37℃,起始pH6.5—7.0,250ml三角瓶装液量20ml,接种量6%。在优化好的发酵条件下,该菌可达最高产酶水平274.7U/ml。


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