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神经纤维瘤中神经纤维素的表达及细胞来源的研究

靳军华  
【摘要】: 背景和目的 Ⅰ型神经纤维瘤病(neurofibromatosis type 1,NF1)又称Von Recklinghausen's病,是一种常染色体显性遗传病。目前研究认为:NF1患者的神经纤维瘤是NF1基因突变导致其下调原癌基因ras产物活性的功能减弱甚至缺失所引起的良性肿瘤,但在NF1基因产物水平的确切发病机制尚未确定。 孤立性神经纤维瘤(solitary neurofibroma),临床上是指没有神经纤维瘤病其它表现的局部单发的神经纤维瘤,也是一种良性瘤样增生性病变,患者NF1基因并未发生突变异常,其具体发病机制尚不清楚。 在临床上,NF1神经纤维瘤和孤立性神经纤维瘤都主要表现为皮肤或皮下出现神经纤维瘤,而且NF1早期患者也多表现为单发神经纤维瘤,常规病理检查两种瘤组织组成、形态非常相似,NF1目前诊断主要是依据1987年美国国立健康研究院(NIH)制定的病理结合临床的综合诊断标准,而且至今,人们仍不确定哪种细胞为肿瘤的真正来源细胞。本课题从NF1基因产物水平进一步研究NF1神经纤维瘤和孤立性神经纤维瘤二者发病机制的差异,并通过抗体标记加细胞形态计数分析二者的细胞构成,旨在为认识NF1神经纤维瘤的发病机理提供实验依据,为病理学区分诊断两种神经纤维瘤的研究提供新思路,并且也为两种肿瘤来源细胞的研究提供初步实验依据。 材料与方法 选用自1997年至2005年在郑州大学第一附属医院整形外科手术并经病理证实的33例神经纤维瘤作为实验标本,从病理科获得标本蜡块。其中NF1组(实验组)神经纤维瘤19例,男性11例,女性8例,年龄12~37岁,中位数为15岁,诊断标准根据病理诊断以及1987年美国国立健康研究院制定的NF1诊断标准(详见正文引言);孤立性神经纤维瘤组(对照组)神经纤维瘤14例,男性6例,女性8例,年龄23~71岁,中位数为35岁,其诊断以没有家族史和神经纤维瘤发生后6年内无NF1其它表型出现为标准。本课题采用HE常规染色两组神经纤维瘤组织,用免疫组化SP法染色技术,抗神经纤维素N端的单克隆抗体,分别检测NF1基因产物神经纤维素蛋白在NF1神经纤维瘤以及孤立性神经纤维瘤中的表达情况,并通过标记S100蛋白结合细胞形态计数分析NF1神经纤维瘤和孤立性神经纤维瘤的细胞构成。所测数据用SPSS10.0软件包进行统计分析,检验水准α=0.05。 结果 1.HE染色结果 NF1组及孤立性神经纤维瘤组两组瘤组织的细胞形态、组成、排列以及大体增生程度无明显差异。 2.免疫组化法检测神经纤维素蛋白结果 NF1组神经纤维瘤组织中见大部分细胞胞浆不着色,一部分细胞胞浆阳性着色呈棕黄色,另外还有一小部分细胞胞浆弱阳性着色呈淡黄色,神经纤维素呈低表达甚至不表达;孤立性神经纤维瘤组的瘤组织几乎全部细胞均呈阳性着色为棕黄色。NF1组阳性率平均33.15±2.45%,孤立性神经纤维瘤组阳性率平均99.44±0.29%,二者比较,差异有统计学意义(t=26.85,P<0.01),本实验还意外发现在NF1神经纤维瘤和孤立性神经纤维瘤中均有或多或少的阳性细胞胞核也着色。 3.免疫组化法标记S100蛋白结合细胞形态计数结果 在高倍镜(×400)下细胞计数,结果表明NF1组和孤立性神经纤维瘤组的瘤组织均主要由雪旺细胞、成纤维细胞组成,其中雪旺细胞所占比例明显高于成纤维细胞,是瘤组织的主要细胞成分。在NF1组神经纤维瘤组织中雪旺细胞、成纤维细胞、其它细胞所占百分比均值分别为70.07%,25.84%和4.09%,雪旺细胞与成纤维细胞间比较差异有统计学意义(t=26.39,P<0.01);在孤立性神经纤维瘤组的瘤组织中雪旺细胞、成纤维细胞、其它细胞所占百分比均值分别为79.21%,14.77%和6.02%,雪旺细胞与成纤维细胞间比较差异也有统计学意义(t=48.76,P<0.01)。 结论 1.NF1神经纤维瘤的发病原因在蛋白水平上可能是神经纤维素的减少和缺失,而孤立性神经纤维瘤的发病可能与神经纤维素蛋白减少无关。 2.通过检测神经纤维素进行病理学区分NF1神经纤维瘤和孤立性神经纤维瘤是一种值得借鉴和深入研究的方法。 3.神经纤维素这个胞浆蛋白可能也存在于胞核。 4.在NF1神经纤维瘤和孤立性神经纤维瘤两组瘤组织中,均主要由雪旺细胞和成纤维细胞构成,其中雪旺细胞所占比例远超过成纤维细胞,倾向于是两种神经纤维瘤的来源细胞。


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