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ITP患儿骨髓巨核细胞DNA倍体分布的测定及临床意义

管玉洁  
【摘要】: 背景和目的 特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)是临床上最常见的一种出血性疾病,临床上可分为急性型(aITP)和慢性型(cITP)两种。传统的临床分型主要依据主诉病程,病程小于6个月为aITP;大于6个月为CITP。然而因隐性病程的存在,这种临床分型与实际出入较大,有不少初诊定为aITP的患儿转化成了cITP。目前不仅有大量研究表明两者临床上有区别,而且发病机理也存在差异,提示aITP与cITP可能是两个不同的疾病,因此两者治疗上也有区别。根据回顾性资料,儿童cITP发病常常是不可预见的、隐性的、自发性的或是经治疗诱导后缓解的,其概率大概为30-80%,比成人高,这一发现对cITP的治疗尤为重要。因此能够在疾病早期即作出真正意义上的临床分型对疾病的治疗有重要的指导意义。现已证实ITP病人骨髓巨核细胞(Megakaryocytes,MKs)均存在不同程度的成熟障碍,导致DNA的倍体数目增加,伴或不伴有外周血血小板平均体积的增大,然而DNA倍体数目增加在急慢性ITP病人中有没有区别,能否早期预测ITP的发展过程?骨髓巨核细胞多倍体化程度与血小板平均体积有没有相关性?目前,有关研究少见报道。因此阐明巨核细胞多倍体化程度、血小板平均体积与ITP的病程关系,探讨ITP患儿的预后性指标的选取与确立,有助于在初诊时即作出临床分型提供理论和实验室依据。 对象和方法 (1)我院ITP患儿26例,其中aITP16例,cITP10例,均符合1998年全国小儿血液学会议诊断标准,年龄2个月-13岁,标本收集均于aITP患儿治疗前、cITP患儿停药物治疗1月后留取。正常对照组儿童8例(为无血液系统及免疫系统疾病者),年龄1.5岁-10岁。(2)EDTA试管留取外周血2-3ml,血细胞分析仪检测血小板计数、血小板平均体积;常规做骨髓涂片,瑞氏染色,进行巨核细胞形态学观察;无菌抽取骨髓1.5ml-3ml注入改良的PBS中,Percoll密度梯度分离法分离提取骨髓巨核细胞,对骨髓巨核细胞进行细胞膜特异性抗原CD_(42a)和DNA双色荧光标记,FACS流式细胞仪检测巨核细胞染色体数目,观察巨核细胞倍体分布情况;aITP患儿自发病后至少随访6个月以上,cITP患儿及正常儿童不作随访。 结果 16例aITP患儿,有3例病程超过了6个月,转化成了cITP。试验结果为13例aITP患儿、10例cITP患儿作回顾性分析后所得。 (1)骨髓巨核细胞染色体倍体数目与病程:巨核细胞经双色荧光标记后流式细胞仪检测显示:正常对照组骨髓巨核细胞DNA分布以16N及32N为主,其次为8N及4N细胞;ITP患儿骨髓巨核细胞DNA分布仍以16N及32N为主,但2N、4N、8N细胞总数所占比例下降,32N及以上细胞总数所占比例升高,二者有显著差异(P<0.05)。aITP、cITP骨髓巨核细胞DNA倍性分布:2N、128N有明显差异(P<0.01)。(2)骨髓涂片巨核细胞形态观察与病程:ITP患儿骨髓巨核细胞存在成熟障碍,幼稚及颗粒巨核细胞所占百分比与正常儿童相比有显著差异性(P<0.05)。aITP、cITP患儿间巨核细胞形态无显著差异(P>0.05)。(3)外周血小板相关指标与病程:aITP、cITP患儿间外周血小板计数存在明显差异(P<0.05),血小板平均体积存在明显差异(P<0.05)。aITP血小板计数较低(≤20×10~9/L),血小板平均体积亦低(≤8fl);cITP血小板计数较高(≥20×10~9/L),血小板平均体积亦高(≥9fl)。 结论 本研究提示:(1)ITP患儿骨髓巨核细胞存在成熟障碍,幼稚及颗粒巨核细胞所占比例增高,巨核细胞DNA倍体数目增多。(2)aITP、cITP患儿骨髓巨核细胞DNA倍体分布有明显差异(P<0.05),巨核细胞DNA倍体化程度或许可作为病程的预后指标。(3)临床上按主诉的病程分型与实际临床类型不完全吻合。


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