低能N～+注入L-Ile产生菌诱变选育及发酵条件研究

【摘要】： 离子注入用于微生物诱变可以在损伤轻的情况下，获得较高的突变率和较宽的突变谱，而且在一定程度上能克服菌种对传统诱变源的的抗性饱和等优点。 通过对L-异亮氨酸产生菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.998进行N~+离子注入，结合紫外线诱变及乙硫氨酸抗性筛选，筛选出诱变菌株N24。其L-异亮氨酸产量由原来0.446g／100ml提高到0.642g／100ml，高出出发菌株43.95％，突变株具有良好的遗传稳定性。 运用单因素法及正交试验法对突变菌株N24摇瓶发酵的种子培养基、发酵培养基进行了优化。种子培养基为：葡萄糖7％，玉米浆1.8％，蛋白胨0.5％，KH_2PO_4 0.1％，MgSO_4 0.05％，尿素0.4％(单灭)。发酵培养基为：葡萄糖12％，(NH_4)_2SO_4 6％，K_2HPO_4 0.06％，玉米浆1.0％，麸皮水解液1.0％。采用优化种子及发酵培养基，突变株N24的L-异亮氨酸产量达0.744g／100ml，较原培养基的0.642g／100ml提高了15.89％。 对突变菌株N24摇瓶发酵条件进行优化，在初始pH7.2，CaCO_3调节pH，接种量10％，装液量25ml／500ml，转速200rpm，28℃条件下，发酵72h，L-异亮氨酸产量达到0.775g／100ml，较原培养条件提高了4.17％。 突变株N24在优化发酵培养基及发酵条件下，L-异亮氨酸产量达到0.775g／100ml，较出发菌株的0.446g／100ml提高了73.77％，并具有良好的遗传稳定性。