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山茱萸有效成分的提取及相关基础研究

韩志慧  
【摘要】: 山茱萸为山茱萸科木来木属落叶小乔木Cornus officinalis Sieb. et Zucc.燥成熟果肉,具有补益肝肾、涩精固脱的功效。其中的五环三萜酸、皂苷等由于具有抗炎、抗病毒、抗氧化等多种生理活性日益受到重视,已被广泛用作药品、保健品和化妆品,成为临床上最常用的名贵中草药之一。河南有通过GAP认证的全国最大的山茱萸生产基地,因此,深入研究其有效成分,综合开发利用山茱萸,具有重要的社会效益和经济价值。 超临界流体萃取技术是一种新型、高效、洁净提取分离技术。随着“天然、营养、回归自然”热潮的兴起,在天然产物的提取领域中占据了独特的地位并倍受瞩目。本文以河南南阳山茱萸为原料,对采用超临界二氧化碳萃取山茱萸挥发油和皂苷工艺的可行性及其适宜条件进行了深入研究和探讨。 首先分别使用水蒸气蒸馏法和不同条件的超临界CO_2制备三个山茱萸挥发油样品,并经GC—MS分析其化学组成,结果发现:水蒸汽蒸馏(SD)样品的成分、颜色、香味与两个超临界样品(SFE)有很大不同,在SD样品中检出52种成分,烃类物质含量高达27.83%;两个SFE样品分别检出24和14种物质,主要成分近似相同,都有高含量的邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯,含量分别为48.31%和45.50%,烃类物质的数量和含量大大减少,表明超临界提取的选择性更高。 以萃取挥发油后的萃余物为原料,对超临界二氧化碳萃取山茱萸总皂苷的工艺进行了深入研究。重点考察了萃取温度、萃取压力、夹带剂种类、夹带剂用量、粒度、萃取时间、CO_2流速等因素对皂苷提取率的影响,并确定了适宜的工艺条件。研究结果表明:最佳工艺条件是粒径为0.2~0.3mm,压力35MPa,温度55℃,夹带剂无水乙醇(v/w)0.75,CO_2流速8kg·h~(-1),萃取时间为3.5h。在此条件下,超临界CO_2萃取皂苷的含量是2.87mg·g~(-1),与传统工艺比较,超临界流体萃取技术用于山茱萸皂苷的提取具有较明显的优势。另外实验研究证明小试结果具有较好的工艺放大效果,显示了超临界流体萃取山茱萸皂苷工艺良好的应用开发前景。 分别采用乙醚、乙酸乙酯、乙醇为提取溶剂,对10批山茱萸药材进行索氏提取并以乙腈-甲醇-水为流动相梯度洗脱,对提取液进行HPLC指纹图谱的分析。结果表明:其中11个峰是各批供试品所共有,共有峰总面积占总峰面积的90%以上,山茱萸药材指纹图谱技术参数的建立,为全面建立山茱萸药材的质量控制标准提供了一定的基础数据。 从山茱萸的超临界提取物中分离出了大量的齐墩果酸(OLA),OLA在临床上主要用于治疗急性黄疸型和慢性中毒型肝炎。但由于药物水溶性差,溶出速度慢,其片剂的生物利用度很低。为了改善药物的溶出,本文采用聚乙烯吡咯烷酮为载体,对齐墩果酸采用固体分散技术制备成OLA的固体分散体。DSC实验表明载体的存在使齐墩果酸晶型转变,IR谱表明齐墩果酸和载体有部分氢键形成,溶出度实验表明,100 min时OLA固体分散体的累积溶出比原药累积溶出高将近7倍,说明固体分散体技术使药物的溶出得到显著改善。 本文静态法测定了齐墩果酸在超临界CO_2中的溶解度,并使用最常用的Chrastil三参数缔合模型、改进的Chrastil四参数缔合模型和李军提出的具有明确物理意义的缔合模型分别对实验数据进行关联。结果发现:三个模型的相对平均偏差分别为7.01%、16.99%、2.32%,第三个模型在齐墩果酸试验数据的关联过程中取得了很好的精度,关联所得到常数也可以得到合理的解释。


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