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郑州地区4种尸食性苍蝇mtDNA中COI基因序列的检测

王旭东  
【摘要】:有机体死亡以后,尸食性蝇类首先侵入尸体,并具有一定演替规律,这一演替规律,已被国内外专家、学者所证实,也是进行死亡时间(PMI)推断的理论依据。不同种类的苍蝇,其在尸表的演替规律各不相同,因此,尸食性昆虫的种属鉴定是实际检案的首要步骤,传统上根据形态学特征鉴定尸食性苍蝇种类,形态学的鉴定技术已经非常成熟。 尸食性苍蝇形态上的类似性,尤其是卵、蛹、蛆形态的类似性向法医工作者提出了挑战。为了解决单纯依据形态学方法不能鉴定苍蝇卵和一龄幼虫的种类的难题,法医昆虫学家一直在探索一种比形态学鉴定更为有效的方法,随着分子生物学理论和技术的进展,一种分子学的鉴定方法建立起来。近些年来的研究证明,通过DNA的检测来进行物种鉴定是一个好办法。 本实验通过研究郑州地区3-9月份常见尸食性苍蝇线粒体DNA上细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ(COⅠ)的基因序列来对尸食性苍蝇进行分类。 方法将采集于郑州地区不同试验地点(郑东新区、郑大新区、郑州市区)、来源于试验用大白鼠尸体上的17个具有不同发育形态(成虫、蛹、蛆)的苍蝇作样本,利用改进的小型昆虫DNA匀浆提取方法提取上述样本的mtDNA;再设计引物扩增COⅠ基因序列片断;扩增产物经聚丙烯酰胺非变性凝胶垂直电泳检测后,用PCR胶回收试剂盒纯化;进行正反双向测序;测序结果用核酸分析软件CLUSTALx进行完全比对;用MEGA3.1软件构建系统发育树。 结果从郑州地区上述试验地点的动物尸体材料上选取的17只苍蝇样本的mtDNA上COⅠ片段的序列分析结果显示:17只苍蝇样本的碱基分歧均数在种内均小于1%,在种间均大于3%;用MEGA3.1软件构建的系统发育树显示:这17只苍蝇标本聚类为4个大分支,即被系统分类为4个种。 结论利用mtDNA上COⅠ序列分析所做的系统学分类结果和传统的形态学分类结果一致,并且能解决形态学不能鉴定卵、一龄幼虫的难题,是进行尸食性苍蝇种类鉴定的有效方法,具有一定的实用价值。


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