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赤拟谷盗抗磷化氢品系细胞色素P450研究

王雄  
【摘要】: 为探讨细胞色素P450在赤拟谷盗Tribolium castaneu对磷化氢产生抗性中的作用,本论文主要就抗磷化氢赤拟谷盗抗性品系的筛选与抗性测定、细胞色素P450抑制剂(氧化胡椒基丁醚)对抗性的增效作用、细胞色素P450的酶含量、单加氧酶活性等生化毒理学参数的测定,及赤拟谷盗细胞色素P450基因在敏感和抗性品系中的表达差异进行了初步研究。结果如下: (1)用磷化氢快速击倒成虫法测定赤拟谷盗品系AK、SQ(F_0)、SQ(F_1)、SQ(F_2)、SQ(F_3)、SQ(F_4)、SQ(F_5)、SQ(F_6)、SQ(F_7)对磷化氢的半数致死时间KT_(50)值和用FAO推荐的抗性测定方法得到的半数致死浓度LC50值之间的回归关系式为:Log(LC_(50))=1.2401Log(KT_(50))-3.3606,相关系数的平方即R2为0.997; (2)赤拟谷盗抗性品系SQ(F1)在高浓度磷化氢的选择压下连续处理6代,LC_(50)值由F1代的2.78mg/L上升为F7代5.21mg/L,抗性倍数高达854.10倍,说明赤拟谷盗在磷化氢选育下对磷化氢敏感性下降,抗性增强;而对于高抗性的品系进行高选择压选育,抗性增长比较缓慢; (3)用细胞色素P450酶的抑制剂(氧化胡椒基丁醚)处理赤拟谷盗抗性品系结果显示,抗性品系SQ(F_0)、SQ(F_1)、SQ(F_4)增效倍数分别为1.03倍、1.07倍和1.12倍,与抗性倍数呈正相关; (4)赤拟谷盗磷化氢抗性品系P450含量和b_5含量均高于敏感品系,最高抗性品系SQ(F4)成虫分别是敏感品系成虫的2.13倍和2.96倍;不同发育阶段敏感和抗性品系b_5含量的增长均与P450含量的增加具有较高的相关性;P450含量和b5含量升高可能是赤拟谷盗对磷化氢抗性产生的重要因素且这两个成分在抗性的形成过程中可能起到相互协同作用; (5)赤拟谷盗磷化氢抗性品系对对硝基苯甲醚-O-脱甲基酶活性(PNOD)、甲氧试卤灵-O-脱甲基酶活性(MROD)和乙氧基香豆素-O-脱乙基酶活性(ECOD)活性均高于敏感品系,最高抗性品系SQ(F4)成虫分别是敏感品系成虫的1.38倍、1.65倍和1.36倍;P450还原酶活性在抗性品系中与敏感品系基本相同; (6)在赤拟谷盗各抗性品系的幼虫中3个基因的mRNA在不同组织中的表达具有组织特异性;抗性品系SQ(F_0)中肠组织中CYP4Q7、CYP4Q4、CYP类似基因基因分别是敏感品系的2.00、3.74、1.74倍,由P450基因在不同抗性品系间的的表达差异推测其可能与赤拟谷盗磷化氢抗性有一定关系。


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