一株稻瘟病拮抗菌株的筛选、诱变育种及抗菌谱测定

【摘要】： 稻瘟病严重危害水稻生产、稻瘟病抗病品种抗性易于丢失及化学农药污染环境,使稻瘟病的生物防治研究具有重要意义。枯草芽孢杆菌对稻瘟病菌具有拮抗作用。因此,从自然生态环境中寻找一株拮抗活性高的枯草芽孢杆菌,研发成稻瘟病生防试剂,对防治稻瘟病和保护生态环境,具有重要意义。 本研究从黄河稻区水稻根际土壤中分离出耐高温芽孢菌722株,从中挑取形态、色泽与枯草芽孢杆菌标准株DB403相似的单菌落进行划线培养,分离得到菌落102株,经发酵上清抑制菌丝生长实验初筛得到对稻瘟病菌有抑制作用的菌株43株,通过平板对峙法复筛筛选出具有较高拮抗作用的菌株27株。通过形态学观察和生理生化指标鉴定,得到具有拮抗活性枯草芽胞杆菌疑似菌株7株。挑取其中抑菌活性最强的一株进行16SrDNA鉴定,将测得的16S rDNA基因序列提交至Genbank(登陆号为FJ755787),用blast与Genbank中基因序列进行同源性比较,发现与枯草芽孢杆菌16S rDNA具有99%同源性。综合形态学、生理生化指标及16S rDNA序列分析结果,判定此菌为枯草芽孢杆菌,命名为BS501a。 为提高其拮抗活性,本研究采用N~+离子束两次注入和~(60)Coγ射线进行诱变,经初筛和复筛,并用spss16.0数据分析软件对实验数据进行分析,得到5株拮抗活性提高的菌株。对这5株菌株进行遗传稳定性试验,经过5次传代,得到一株拮抗活性提高、遗传性能稳定的菌株BSC45,拮抗活性仍稳定在23.64%。测定BSC45抗菌谱,发现BSC45是一株广谱的抗植物病原真菌菌株。为检测其生物安全性,本研究以KM小鼠为实验对象,对BSC45发酵上清冻干粉进行急性经口毒性试验,其LD50值500 mg/kg,证明属于低毒级,符合绿色生物农药要求。因此,本研究为将枯草芽孢杆菌BS501a开发成生防试剂奠定了基础。