收藏本站
收藏 | 论文排版

禽巴氏杆菌基因组的原核表达及感染血清的吸附

张爱国  
【摘要】:禽巴氏杆菌病又称为禽霍乱,是由禽巴氏杆菌引起的一种接触性的败血性传染病,该病具有突发性与流行性,给家禽养殖业造成巨大的经济损失,因此该病是重点防治的家禽类疾病之一。近年来接种疫苗成为预防禽巴氏杆菌病的一种有效措施,因此研制高效疫苗已成为研究工作的热点。 引起禽巴氏杆菌病的病原菌是禽巴氏杆菌,又称为禽多杀性巴氏杆菌,寻找禽巴氏杆菌的致病基因,能够更好地了解其致病机理,对有效地防治禽巴氏杆菌病具有重要的意义。致病菌在宿主的体内表达而在体外不表达的功能基因称为“体内诱导基因”(in vivo-induced gene)。研究表明,这些体内诱导基因对病原菌在体内的生存和致病性有着十分重要的意义。在本研究中,构建了禽巴氏杆菌基因组表达文库,对重组质粒进行原核表达分析,然后利用体内诱导抗原技术(in vivo-induced antigen technology,IVIAT),通过感染了病原菌的宿主血清来筛选病原菌在宿主体内特异性表达的病原基因,为新疫苗和新型诊断方法研发提供新靶标,为进一步阐明该病的致病分子机理提供了理论依据,同时为深入研究的疫苗研制工作做了铺垫。 本文首先构建禽巴氏杆菌CVCC474的基因组表达文库:提取禽巴氏杆菌的基因组,用限制性内切酶Sau3A I酶切,然后胶回收500-3000bp的基因组DNA片段。限制性内切酶BamH I酶切原核表达载体pET30a/b/c,胶回收线性载体片段,用碱性磷酸酶CIAP去磷酸化。将基因组酶切片段与载体pET30a/b/c连接后,转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,构建了禽巴氏杆菌CVCC474基因组表达文库,经计算文库容量为l.5×104,随机挑取9个克隆进行双酶切实验,结果显示随机挑选的9个克隆与所用的表达载体和目的基因片段大小相符,证明禽巴氏杆菌基因组表达文库构建的比较成功。然后用碱裂解法提取重组质粒,经IPTG诱导后,与原核表达载体pET30a/b/c对照,证明了表达产物为构建的重组质粒所表达的蛋白。 血清的吸附及禽巴氏杆菌基因组表达文库的筛选:收集感染禽巴氏杆菌雏鸡的血清,分别用体外培养的大肠杆菌BL21(DE3)(含pET30a空载体)和禽巴氏杆菌对鸡血清进行吸附,目的是去除血清中针对体外表达的抗原的抗体,采用间接ELISA检测血清吸附过程中抗体的效价,结果显示血清经过吸附后,抗体滴度呈现明显下降,当血清经过第三次吸附后,抗体的OD值基本保持不变,证明吸附的效果较好,此时血清里只剩下了与禽巴氏杆菌在体内诱导表达的抗原相反应的抗体亚群。然后采用菌落原位免疫杂交的方法对基因组表达文库进行筛选,结果没有筛选到阳性克隆,其原因有待进一步研究。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 谢芝勋,谢志勤,刘加波,庞耀珊,邓显文;广西禽巴氏杆菌的分离及其特性的测定[J];中国家禽;1999年09期
2 王卓明,吴佩婵,李幼博,吴文福,李嘉爱;42株禽巴氏杆菌特性的研究[J];中国预防兽医学报;1999年03期
3 谢芝勋,庞耀珊,谢志勤,邓显文,刘加波;应用聚合酶链反应检测禽多杀性巴氏杆菌的研究[J];中国预防兽医学报;1999年06期
4 吾鲁木汗·那孜尔别克;彭清忠;何翠;张磊;严芳;恩特马克·布拉提白;;禽巴氏杆菌C_(48-3)株成熟黏附蛋白基因cpm39的克隆及序列分析[J];生物技术通讯;2008年01期
5 尹秀凤;王元珍;丁美娟;许秀梅;黄显明;张海涛;毛火云;张小飞;;禽巴氏杆菌Pm-HB株的分离与鉴定[J];中国畜牧兽医;2014年05期
6 曹素芳;黄青云;韩先干;陈红英;邓宪方;;禽巴氏杆菌C_(48-1)株成熟外膜蛋白H基因的原核融合表达[J];中国预防兽医学报;2006年01期
7 金天明,高丰,喻华英;禽巴氏杆菌抗链霉素耐药基因StrA的克隆及同原性比较[J];内蒙古民族大学学报(自然科学版);2004年01期
8 曹素芳;黄青云;韩先干;陈红英;邓宪方;;禽巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因克隆及序列分析[J];中国预防兽医学报;2006年03期
9 吴孔兴,黄青云,丘家军;禽巴氏杆菌大肠杆菌融合二联弱毒菌株F_4的培育[J];华南农业大学学报;2002年01期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 张爱国;禽巴氏杆菌基因组的原核表达及感染血清的吸附[D];河南科技大学;2014年
2 严芳;体内外培养禽巴氏杆菌荚膜蛋白,外膜蛋白及重组蛋白Cpm39免疫保护功能的研究[D];吉首大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 姜愈;禽巴氏杆菌感染猪的病例报告[N];中国畜牧兽医报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978