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β-防御素1基因在小鼠乳腺组织中表达的研究

孟丽丽  
【摘要】:β-防御素具有广谱的抗菌活性且是宿主固有防御的重要参与者,在奶牛乳腺炎防治方面具有广阔的应用前景。为了研究β-防御素1(β-defensin 1,Defb1)基因在小鼠乳腺中的表达情况,本文以小鼠第四对乳腺组织为研究对象,用半定量RT-PCR法探讨了小鼠乳腺发育周期(妊娠、泌乳、退化)中Defb1基因的表达规律及大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠乳腺炎时乳腺中Defb1基因表达的差异。 一、Defb1基因在小鼠乳腺组织中的表达。利用Genbank上已公布的小鼠Defb1基因序列,设计一对引物,小鼠乳腺组织提取总RNA进行RT-PCR,将PCR产物与pMD-19T载体连接后转化到DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆、测序,并进行序列比对。结果表明: Defb1基因在小鼠乳腺组织中有表达。 二、小鼠乳腺发育周期中Defb1基因的表达规律。分别取小鼠妊娠1d、6d、12d、18d;泌乳1d、6d、12d、18d;21天自然断乳0d、1d、2d、3d、4d、5d的乳腺组织,采用半定量RT-PCR法进行研究。结果显示:随着妊娠的进行Defb1转录水平逐渐升高,且各时期差异显著,妊娠18d转录水平最高;在泌乳过程中,Defb1转录水平呈下降趋势,与泌乳1d相比,泌乳6d时Defb1mRNA水平下调,但差异不显著,妊娠12d,18d Defb1的转录水平显著下降;自然断乳后Defb1基因表达量呈现先下降后上升再下降的变化趋势,与0d相比,断乳后第1d和第2d mRNA水平即显著降低,3d时Defb1转录水平出现显著升高,达到峰值。此后4d,5d Defb1 mRNA水平又下降。 三、Defb1基因在LPS诱导的小鼠乳腺炎中的表达差异。按1.4μg/只剂量在泌乳10d母鼠第四对乳腺基部注射LPS,诱导小鼠乳腺炎。分别取注射LPS前(0h)和注射后6h、9h、12h、24h乳腺组织,采用半定量RT-PCR法研究Defb1表达量差异。结果显示:与0h相比,诱导后各时期Defb1基因的表达量均显著增加,诱导后的6h,9h Defb1转录水平显著上调,9h时达到最高峰。与9h相比,诱导后12h、24h Defb1转录水平都显著降低,12h和24h Defb1基因的表达量差异不显著。


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