收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

黄曲霉毒素B_1的生物降解及其在肉鸡生产中的应用研究

左瑞雨  
【摘要】:鉴于霉菌毒素B1(AFB1)的严重污染及其对人类和动物健康的严重危害,采取有效措施对霉菌毒素进行脱毒处理成为函待解决的问题。本文通过筛选得到对黄曲霉菌生长及AFB1降解效果较好的菌株,并对AFB1降解酶进行分离纯化,之后将益生菌与AFB,降解酶配合应用于肉鸡生产中,观察其对肉鸡饲料中AFB1的解毒效果,为其在动物生产中的应用提供依据。 (1)通过测定菌丝重量和AFB1产量,筛选对黄曲霉菌生长和产毒抑制效果最好的乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌,并通过正交试验筛选对黄曲霉菌生长和产毒抑制效果最好的益生菌组合。结果显示枯草芽孢杆菌上清液对黄曲霉生长的抑制效果最好,抑制率高达81.87%,乳酸菌上清液抑制产毒效果最好,上清液中AFB1含量仅为4.69μg/L,抑制率高达97.09%。乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌单独培养后以2:1:2的比例混合,对霉菌生长和AFB1产量具有显著抑制作用(P0.05)。 (2)在微生物的液体培养基中添加高浓度的AFB1,通过测定培养液中细胞干重、吸光度值以及pH观察微生物的生长情况,初步判断乳酸菌A2和4株枯草芽孢杆菌均具有较高的AFB1降解能力,其中枯草芽孢杆菌B4的降解率最高,达到38.38%(P≤0.05)。乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌单独培养后以2:1:2的比例混合对AFB1的降解试验中,48h时对AFB1的降解率最高,达到82.72%(P≤0.05)。 (3)通过正交试验,研究益生菌组合与酵母细胞壁、寡糖配伍对AFB1的降解作用。研究表明:益生菌组合与酵母细胞壁和寡糖配伍与仅使用益生菌组合对AFB1的降解效果差异不显著(P0.05),对AFB1的降解率分别为88.30%和85.05%。因而,在后期试验中,仅选择益生菌组合来研究其对AFB1的降解效果。 (4)以AFB1作为碳源和能源进行AFB1降解菌株的筛选。筛选得到的细菌和真菌对AFB1的降解率分别为58.04%和77.05%。对降解AFB1的真菌进行固体发酵培养,提取AFB1降解酶粗酶液并通过离子交换层析和凝胶层析,对AFB1降解酶进行分离纯化。通过凝胶层析分离出蛋白分子量约为33.7KDa的AFB1降解酶,对AFB1的降解率达54.33%。经过16S rDNA和26SrDNA的鉴定结果显示,筛选得到的AFB1降解细菌为枯草芽孢杆菌,真菌为米曲霉。 (5)鉴于分离纯化后AFB1降解酶的降解效率低于粗酶液,将益生菌组合与AFB1降解酶的粗酶液以不同比例混合,测定其对AFB1的降解能力。结果表明,益生菌组合与AFB1降解酶按2:3的组合比例对AFB1的降解效果最好,对AFB,的降解率达78.07%。 (6)将益生菌和AFB1降解酶添加到含有AFB1的饲料中,通过测定肉鸡生产性能、血清和肝脏相关酶活性、抗氧化指标及其相关基因表达量的变化等指标,研究益生菌和AFB1降解酶对肉鸡饲料中AFB1的解毒效果。饲养试验分为前期(1-21d)、中期(22-42d)和后期(43-72d)三个阶段。前期选择1d健康AA肉仔鸡200只,分为5个处理,每个处理5个重复,每个重复8只鸡。中期在前期原处理内选择150只鸡,分为5个重复,每个重复6只鸡。后期选择75只鸡,将各组鸡只混合重新分为5组,每组5个重复,每个重复3只鸡。在前期和中期试验中,A组为基础日粮(对照组),B(负对照组)、C、D和E组分别在基础日粮添加100μg/kg的AFB1,并按照0、0.05%、0.10%和0.15%的比例分别添加益生菌和AFB1降解酶的复合物。在后期试验中,A组为基础日粮(对照组),B、C、D和E组分别在基础日粮添加AFB1量为400、200、400和800μg/kg,除B组不添加益生菌和AFB1降解酶的复合物外(负对照组),C、D和E组分别在基础日粮添加0.15%益生菌和AFB1降解酶。其主要结果如下: 在试验前期,与负对照B组相比,添加益生菌和AFB1降解酶的各组肉鸡的末重、平均日增重均有不同程度的提高,死亡率和腹泻率均有显著降低(P≤0.05),其中添加量最大的E组与B组相比,末重和,平均日增重分别提高了11.59%和16.87%(P≤0.05),腹泻率和死亡率分别降低了56.58%和88.89%,且肝脏和法氏囊的重量均有显著提高(P0.05)。与其它处理组相比,B组粗脂肪和磷代谢率显著降低(P≤0.05)。日粮中添加益生菌和AFB1降解酶显著降低了十二指肠中大肠杆菌的数量(P≤0.05),显著提高了盲肠中乳酸菌的数量(P≤0.05),肌胃、十二指肠、回肠和盲肠中蛋白酶活力皆有显著提高(P≤0.05),血清中间接胆红素、低密度脂蛋白、谷酰转肽酶和总抗氧化能力显著升高(P≤0.05),各处理组基因组DNA无显著变化。总体来看,由于前期基础日粮中AFB1的含量过高,各处理组鸡只的生产性能均受到了严重抑制,但益生菌和AFB1降解酶的解毒效果得到了充分的体现。 在试验中期,添加益生菌和AFB.降解酶的各组鸡只除了腹泻率显著降低外(P≤0.05),其它各项生产性能各处理组之间无显著差异(P0.05)。与其它处理组相比,B组的粗蛋白质代谢率显著降低(P≤0.05)。D和E组全净膛率显著地高于B组(P0.05)。添加益生菌和AFB1降解酶的各处理组鸡的十二指肠、回肠和盲肠的总细菌数均显著显著高于A和B组(P≤0.05)。与B组相比,日粮中添加益生菌和AFB1降解酶对各处理组鸡回肠淀粉酶活力和盲肠脂肪酶活力皆有显著提高(P≤0.05)。与对照组相比,添加益生菌和AFB1降解酶各组鸡血清中谷草转氨酶的活力皆有显著提高(P0.05),谷胱甘肽过氧化物酶皆有不同程度的下降(P0.05);肝脏和胸肌中AFB1含量无显著差异(P0.05),但B和D组鸡肝脏DNA有部分损伤。 在试验后期,添加益生菌和AFB1降解酶显著缓解了AFB1对肉鸡生产性能的抑制。AFB1添加量为200μg/kg的C组,鸡只的末重、平均日增重、平均日采食量和料.肉比显著高于B、D和E组(P≤.05),与对照组无明显的差别(P0.05)。而未添加益生菌和AFB1降解酶的B组和AFB1添加量达800μg/kg的E组体重则出现了负增长。同等AFB1添加量的B组和D组,因为D组添加了益生菌和AFB1降解酶,其体重、平均日增重、、平均日采食量和料肉比均显著高于B绢,平均日采食量和末重分别提高了23.39%和29.81%(P≤0.05)。与B组相比,其余各组的有机物质、粗蛋白质、钙和磷的代谢率均显著提高(P≤0.05)。随AFB1添加量的增加,显著降低了肉鸡的屠宰性能:但AFB添加量较小的C组,屠宰率、全净膛率、腹脂、脾脏和肌胃的重量与B组相比皆有显著提高(P≤0.05)。各处理组十二指肠的总菌数显著升高(P≤0.05),大肠杆菌数目显著降低(P≤0.05);十二指肠和回肠淀粉酶活力、肝脏超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和总抗氧化能力均有显著提高(P≤0.05)。毒素添加量最大的E组,肝脏基因组DNA损伤严重。总体来看,在AFB.含量为200μ/kg的肉鸡饲料中添加0.15%的益生菌和AFB.降解酶,可以显著缓解AFB1对肉鸡生产性能的不良影响,这为AFBI的生物降解和应用奠定了基础。 (7)根据生产性能指标选择43-72d时A、B和D组的公鸡各3只,将肝脏样品等比例混合后进行肝脏中相关基因表达量的测定。结果表明:对于氧化还原酶系来说,A组与B组相比,B组表达量下调的基因占表达量发生变化的基因总数的62.5%:B组与D组相比,D组的大多基因表达量均出现了上调。对于细胞生长酶系来说,B组与D组相比,D组的基因表达量均出现了下调。对于免疫过程控制相关酶系来说,B组与D组相比,D组的基因表达量发生上调和下调的各占50%。对于代谢过程控制相关酶系来说,A组与B组相比,B组的大多基因的表达量均出现了下调,B组与D组相比,D组的大多基因的表达量均出现了上调。对于调节细胞凋亡的基因来说,A组与D组相比,基因表达量均出现了下调,B组与D组相比,D组75%的基因表达量均出现了下调。由此可见,在肉鸡日粮中添加益生菌和AFB1降解酶可显著缓解因添加AFB1所导致的影响生产性能发挥的相关基因表达量发生不良改变的问题,也为今后从基因水平上研究AFB1的致病机制并采取措施缓解其危害奠定了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 宋理平;张延华;周嗣泉;秦玉广;王秉利;徐海强;;益生菌在水产饲料中的应用[J];中国水产;2006年02期
2 潘宝海,李德发,谯仕彦;益生菌、益生素及合生剂的作用机理和相互关系[J];中国饲料;2000年15期
3 石军,陈安国,邵明丽;益生菌在水产养殖中应用的研究进展[J];粮食与饲料工业;2002年04期
4 盛延岭,刘树英;益生菌发酵乳制品是提高机体免疫力的有力武器[J];中国乳业;2003年05期
5 李雨来;ortwin simon;;作饲料添加剂的微生物——益生素[J];饲料世界;2006年Z1期
6 郭文;高凤祥;潘雷;张少春;王雪;兰锡禄;;益生菌在大菱鲆养殖生产中的应用试验[J];齐鲁渔业;2008年05期
7 陈祈磊;胡又佳;;动物微生态制剂研究应用进展[J];中国微生态学杂志;2009年09期
8 郑德富;冯艳忠;;科学开发益生菌饲料添加剂降低畜产品药残[J];中国畜牧杂志;2010年06期
9 王占锋;张萍;付文卓;张颖;李甜甜;潘博;魏萍;;几株益生菌的体外抗新城疫病毒作用[J];微生物学报;2010年12期
10 林洋;李双喜;谭娜;江国托;;益生菌FQ15基因组DNA四种提取方法的比较[J];黑龙江畜牧兽医;2011年03期
11 刘清源,赵献军;两株益生菌对16种抗菌药敏感性测定[J];动物医学进展;2002年04期
12 王旭明,陈宗泽,袁毅;益生菌作用机理的研究进展[J];吉林农业科学;2002年01期
13 陈桂银;;益生菌在兔营养中的应用(上)[J];中国养兔杂志;2007年02期
14 ;健能AB100益生菌优酪乳酸牛奶——光明乳业的高品质酸奶[J];中国乳业;2007年04期
15 ;益生菌发酵乳和菊粉对肠道功能和微生态的影响[J];中国乳业;2008年01期
16 黄玲;Frede Damgaard;;如何让猪用益生素发挥作用[J];国外畜牧学(猪与禽);2010年06期
17 郭时金;;益生菌的作用机制及在蛋鸡中的应用[J];饲料研究;2011年03期
18 李庆海;;益生菌的功效及作用模式[J];杭州农业与科技;2011年01期
19 陈文杰,冀宏,韩韬,霍红;生料栽培香菇和金针菇过程中益生菌的应用研究[J];食用菌学报;2003年02期
20 周庆民;李桂伟;冯万宇;黄建;安丽娜;王观悦;;猪肠道益生菌的种类及生理功能[J];中国猪业;2010年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 彭军;李勇;;益生菌与肠道功能[A];北京市营养学会第四届会员代表大会暨膳食与健康研讨会论文集[C];2010年
2 王静;李晓颖;李春凤;谷巍;;益生菌对动物营养素吸收与代谢的影响研究[A];2012首届母猪饲料生产与应用技术高端研讨会论文集[C];2012年
3 刘辉;季海峰;单达聪;王四新;王晶;张董燕;王雅民;;益生菌对动物免疫机能影响的研究进展[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
4 王世杰;朱宏;何方;陆淳;;益生菌发酵乳“每日活菌”饮用对成年女性肠道健康的影响[A];中国营养学会妇幼营养第七次全国学术会议论文汇编[C];2010年
5 朱惠萍;;益生菌治疗溃疡性结肠炎的作用机制[A];第二十二届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2010年
6 黄承钰;石磊;;益生菌和代谢综合征研究进展[A];老年营养研究进展与老年营养供餐规范研讨会暨糖尿病肾病医学营养治疗进展学习班资料汇编[C];2011年
7 郭兴华;;新世纪益生菌开发的愿望[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
8 张志强;;益生菌、益生元的研究发展新动向(英文)[A];第三届“益生菌、益生元与健康研讨会”论文集[C];2004年
9 黄俊文;林映才;郑春田;丁发源;朱选;余德谦;;甘露寡糖、益生菌对早期断奶仔猪生产性能和免疫功能的影响[A];猪营养与饲料研究进展——第四届全国猪营养学术研讨会论文集[C];2003年
10 蔡辉益;;生物技术在动物微生态制剂研究中的应用[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 左瑞雨;黄曲霉毒素B_1的生物降解及其在肉鸡生产中的应用研究[D];河南农业大学;2012年
2 白梅;益生菌Lactobacillus casei Zhang长期连续传代过程中遗传稳定性研究[D];内蒙古农业大学;2012年
3 计坚;解淀粉芽孢杆菌SC06介导猪肠道免疫机理的研究[D];浙江大学;2013年
4 Hala Ali Mohammed Ibrahim;[D];南京农业大学;2011年
5 刘芳宁;益生菌对轮状病毒感染和腹泻的保护机制[D];西北农林科技大学;2010年
6 张英春;抑制宋内志贺菌益生菌株的筛选及作用机制研究[D];哈尔滨工业大学;2011年
7 朱守创;益生菌LGG微胶囊化及对提高其存活性的机制研究[D];郑州大学;2013年
8 董晓丽;益生菌的筛选鉴定及其对断奶仔猪、犊牛生长和消化道微生物的影响[D];中国农业科学院;2013年
9 陈晓华;拮抗幽门螺杆菌益生菌的筛选及其干预机制的研究[D];江南大学;2011年
10 李婧妍;合成共轭亚油酸益生菌的筛选及其免疫调节功能研究[D];哈尔滨工业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李龙;复合益生菌发酵饲料工艺参数优化及品质评定[D];上海交通大学;2010年
2 于微;产蛋氨酸益生菌的筛选及应用研究[D];东北农业大学;2010年
3 王选;鸡源抗腹泻芽孢益生菌J-4菌株的筛选、鉴定、发酵条件优化及动物饲喂试验[D];河北农业大学;2011年
4 李琰;益生菌雏鸡ND免疫后免疫器官免疫功能及IL-2 mRNA表达变化[D];东北农业大学;2010年
5 付文卓;两株益生菌对鸡胚肠细胞NO、IFN-γ产生的影响[D];东北农业大学;2010年
6 包海泉;益生菌制剂对家畜免疫促进作用的研究[D];内蒙古农业大学;2004年
7 武浩;益生菌荧光光谱特性的研究[D];江南大学;2009年
8 赵和平;益生菌对溃疡性结肠炎大鼠作用的实验研究[D];山西医科大学;2004年
9 黄倩;益生菌对肠道黏膜免疫的调节[D];河北医科大学;2009年
10 魏银萍;国内5种市售微生态制剂益生菌株的粘附性能研究[D];西南大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者杨晓晶;伊利发布益生菌酸奶临床检测报告[N];中国食品报;2009年
2 赵卓昀;英国:半数益生菌产品不合格[N];新华每日电讯;2006年
3 李娇艳;益生菌的作用被夸大了[N];中国质量报;2008年
4 农新;复合型活性益生菌可替代抗生素[N];中国畜牧兽医报;2009年
5 李国民;益生菌让肠道更健康[N];中国中医药报;2009年
6 王迪;益生菌市场增长势头看好[N];医药经济报;2007年
7 肖飞;荷兰益生菌风波骤起 我国乳品业未被殃及[N];江苏经济报;2008年
8 ;国内乳品业未受荷兰益生菌风波影响[N];中国特产报;2008年
9 本报记者 王建专 实习生 冯勉;益生菌乳品行业将遭遇生死劫[N];江苏科技报;2008年
10 胡左;高密度发酵技术助益生菌产业化[N];中国食品质量报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978