秋眠及非秋眠紫花苜蓿转录组测序及秋眠相关差异基因的筛选

【摘要】：紫花苜蓿是一种优质的多年生豆科牧草,在世界范围内广泛种植。紫花苜蓿的秋眠性是-种适应性生长特性。由于苜蓿的秋眠性与抗寒性呈显著正相关,故前人的研究多集中在不同秋眠型苜蓿与抗寒性有关的物质代谢上。但近年来的研究表明,苜蓿的秋眠性和抗寒性是两个独立的性状。为了研究在紫花苜蓿秋眠过程中哪些基因可能调控或参与了这一过程,我们采用转录组测序技术对两个不同秋眠型的紫花苜蓿品种在不同季节取样,并进行了测序,随后对紫花苜蓿的转录组测序数据进行了组装与注释,进行了信息学分析,并筛选出了潜在的、与紫花苜蓿秋眠性相关的差异基因。本试验共产生了1 60000000条高质量的测序读段(2x1 00 bp),所有这些测序数据采用Trinity软件组装成一条转录组作为参照转录组,转录组中包含了192875条转录本,平均序列长度为856 bp。同时使用MISA软件鉴定出了41973条简单序列重复。通过blastx对紫花苜蓿转录组与其它1 5种已测序植物的蛋白质组进行比对得出了该试验中紫花苜蓿转录组的保守性；通过hmmer软件与植物转录因子数据库鉴定出1350条转录本含有转录因子。最后还对紫花苜蓿四个条件下选定的两两之间的差异表达基因作了分析,以变化倍数在两倍(上调和下调)或以上且调整后的P值小于0.01作为差异基因的筛选条件,每组中有176至521个差异基因不等,差异基因中有已知的和未知的基因,通过结合代谢通路找到与秋眠性可能相关的基因,以及选择差异表达较高的未知基因作为候选基因,为以后研究紫花苜蓿的秋眠机理打开了一个新的突破口。