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乳及乳品中唾液酸含量的检测

冯君  
【摘要】: 本试验共分二个系列,系列Ⅰ建立了一种快速、简便、准确、高效的测定牛奶中唾液酸(Sialic Acid)含量的方法;系列Ⅱ研究了不同时期牛奶中(初乳、常乳、末乳)的唾液酸动态变化模式及奶粉中唾液酸的含量测定。 系列Ⅰ牛奶中唾液酸含量测定的方法建立 建立了一种准确、简便、快速的测定牛奶中唾液酸含量的高效液相色谱法。以Symmetry C18柱(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,柱温:35℃,以1.0%四氢呋喃水溶液(含0.2%磷酸)-乙腈(92:8)为流动相,在波长230nm处检测唾液酸的含量。分别从以下几个影响因素来优化反应条件:从扫描波长、作用时间、温度等探讨最佳反应条件。在10mL的牛奶中加入15mL的三氯乙酸可以使牛奶中的蛋白质沉淀完全,经离心后在上清液与沉淀中分别加入40mL和35mL的0.1mol/L的硫酸在80℃条件下反应120min可以使牛奶中与蛋白质结合的、与低聚糖结合的唾液酸完全释放,然后调节pH值到5,旋转蒸发,定容至10mL,过滤,取滤液1mL,再加入10mg/mL邻苯二氨盐酸盐溶液(用0.2mol/L硫酸氢钠溶液溶解)1mL,在80℃条件下,作用时间50min衍生基本反应完全。结果是线性范围为20~500μg/mL,线性回归方程式为Y=63754X-277658,相关系数r=0.9993,批内变异系数为1.49%,批间变异系数1.98%。在样品中加入低、中、高三种不同浓度的标准品溶液,所有样品的低加标量标准品的平均回收率在93.98%以上;中加标量标准品的平均回收率均在96.33%以上;高加标量标准品的平均回收率均在100.97%以上。结果表明本法简便、快速、无需梯度洗脱、分离效果好,适用于牛奶及乳品中唾液酸含量的检测和研究。 系列Ⅱ不同时期牛奶中唾液酸的动态变化模式及奶粉中唾液酸含量的测定 采取不同时期的牛奶(初乳、常乳、末乳),分别检测其含量,初乳中唾液酸的总量参考值为760.83±13.42μg/mL;常乳中唾液酸总量111.43±2.06μg/mL;末乳中的唾液酸总量79.36±2.41μg/mL。奶粉中的唾液酸含量为476.4μg/g,结果表明,初乳、常乳、末乳中与蛋白质结合的唾液酸含量依次呈现下降的趋势;游离的和与低聚糖结合的唾液酸含量也呈现依次下降的趋势,但初乳中的唾液酸含量最高。


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