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河南省绵羊隐孢子虫种类和基因型在时间轴上的变化规律研究

王永立  
【摘要】: 隐孢子虫病是一种重要的人兽共患原虫病。本试验从2006年7月到2007年7月对分布在河南省4个地区的5个羊场开展为期一年的流行病学调查,在显微镜检测的基础上对发现的绵羊肠道寄生虫虫卵或卵囊进行形态鉴定;利用巢式PCR和PCR-RFLP技术对隐孢子虫卵囊进行基于核糖体小亚基(18S rRNA)基因的种类与基因型分析,鉴定河南省绵羊隐孢子虫流行种类和基因型,确定河南绵羊隐孢子虫分离株和其它种类隐孢子虫之间的分子种系进化关系;并对某隐孢子虫阳性绵羊场进行跟踪调查,以此来分析绵羊隐孢子虫种类和基因型随不同年龄段、不同季节的动态变化规律,为防控人兽共患隐孢子虫病提供理论依据。为了解河南省绵羊肠道寄生虫感染情况,应用寄生虫常规检测方法对在5个规模化绵羊场共采集的1265份粪样进行了寄生虫检查。共检出虫卵和卵囊5类,其中原虫2类(球虫、隐孢子虫);线虫2类(类圆线虫、鞭虫);绦虫1类。本次调查中共发现1178份粪便样品为寄生虫阳性,寄生虫总感染率为93.12%(1178/1265),5个绵羊场的隐孢子虫平均感染率为3.10%,球虫平均感染率为88.94%,鞭虫平均感染率为10.83%,类圆线虫平均感染率为59.11%,绦虫平均感染率为43.96%。本次调查发现绵羊寄生虫混合感染现象比较严重,其中球虫、绦虫和类圆线虫混合感染的比例达到60.10%;绵羊寄生虫感染率呈现随年龄增长而降低的现象。 为掌握河南省绵羊隐孢子虫流行病学资料,应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对分布在河南省4个地区的5个羊场共1701份绵羊粪样进行检查,并对绵羊隐孢子虫感染的风险因素进行评估。结果表明:查出阳性样品80份,隐孢子虫总阳性率为4.70%(80/1701), 3周龄羔羊和产后3周母羊的感染率最高分别达41.18%和6.29%。根据隐孢子虫卵囊形态数值学分析结果,将发现于绵羊的隐孢子虫卵囊初步鉴定为微小隐孢子虫(C. parvum)和安氏隐孢子虫(C. andersoni)。同时我们发现绵羊隐孢子虫感染存在年龄差异,但未见明显的季节性变化。 本试验利用巢式PCR技术扩增80个绵羊隐孢子虫分离株18S rRNA基因,选择限制性内切酶SspⅠ和VspⅠ分别对PCR产物进行消化酶切,进行RFLP分析。39个PCR产物经测序后,用Clustal X1.81、Phylip3.65和DNAStar4.0等生物学软件对扩增的序列进行种系发育分析及同源性分析,以此来确定河南省绵羊隐孢子虫流行种类及基因型。PCR-RFLP和分子种系发育分析结果表明:绵羊隐孢子虫种类和基因型主要有cervine genotype(35/39)、C. bovis (2/39)、C. andersoni(2/39),其中cervine genotype存在着较大的人兽共患风险。 为了分析绵羊隐孢子虫种类和基因型随时间的变化规律,本试验在进行绵羊隐孢子虫流行病学调查的基础上,对阳性羊场的怀孕母羊及其羔羊进行跟踪调查,以此来研究分析绵羊隐孢子虫种类和基因型随年龄和季节的动态变化规律,确定新生羔羊隐孢子虫的来源,探讨羊场隐孢子虫持续存在的机制,最终为研究绵羊隐孢子虫人畜互传机制和制定防控措施提供理论依据。结果显示:Cryptosporidium cervine genotype可以感染每个年龄段的绵羊,绵羊隐孢子虫感染种类和基因型随年龄变化的规律也不如奶牛明显;在绵羊感染的所有隐孢子虫种类和基因型中,cervine genotype一年四季中均为优势基因型,隐孢子虫种类和基因型随季节变化不明显。 本试验利用PCR-RFLP技术和分子种系发育分析,首次鉴定国内绵羊隐孢子虫主要有cervine genotype、C. bovis、C. andersoni,优势虫株为cervine genotype。


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