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不同处理和不同保存时间对重组(H5N1亚型,Re-5株)禽流感病毒效力的影响

赵会连  
【摘要】:本试验采用生产用毒种重组禽流感病毒(H5N1亚型,Re-5株)毒株一定比例稀释后,接种于11日龄非免疫的发育良好的健康鸡胚尿囊腔,每胚0.2mL,在万级生产区域内,温度36℃,湿度70%条件下继续孵育,培养72h后,取其活鸡胚置0~4℃冷库冷却,12h后,收获鸡胚尿囊液,作为未处理抗原。将未处理抗原经过离心机离心,作为离心抗原。将离心后的抗原采用过滤膜包2倍浓缩,作为浓缩抗原。通过对制备的未处理、离心纯化、浓缩纯化的抗原抽样分别进行灭活前的澄清度、病毒半数感染量(EID50)和对鸡红细胞凝集价(HA)的检测试验,确定抗原通过离心、浓缩纯化处理后质量发生的变化。然后,分别采用灭活剂甲醛溶液1.5‰、2.0‰、2.5‰灭活,恒温37℃灭活24h,通过对灭活后的抗原抽样作灭活后无菌检验、灭活检验、HA检验的灭活检测试验,确定未处理抗原、离心纯化的抗原和浓缩纯化的抗原灭活彻底的最低甲醛溶液浓度。最后,将每组中使用最低甲醛溶液浓度的合格的灭活抗原分装、密封包扎好,进行0~4℃保存试验,通过分别保存1个月、2个月、3个月、4个月、5个月后的HA检测并进行油乳剂苗的配制,对油乳剂苗进行外观、性状、粘度、稳定性的物理性状检测和20日龄非免疫鸡的安全性检测和5周龄非免疫鸡的免疫抗体HI检测,确定未处理抗原、离心纯化的抗原和浓缩纯化的抗原的质量效价的稳定性。 通过对制备的未处理、离心纯化、浓缩纯化处理的抗原的澄清度、病毒半数感染量(EID50)和对鸡红细胞凝集价(HA)的检测试验结果对比得出:抗原经过离心、浓缩纯化处理后,不但外观质量得到明显改善,而且效价得到较大提高。浓缩处理的抗原的澄清度高于未处理抗原,低于离心抗原;HA比未处理和离心处理的抗原提高一个滴度;EID50比离心抗原的EID50提高0.2个滴度,比未处理抗原提高0.7个滴度。通过对未处理、离心纯化、浓缩纯化处理抗原的1.5‰,2.0‰,2.5‰甲醛溶液的灭活和灭活后的无菌检验、灭活检验和HA检测试验结果对比得出:未处理抗原灭活彻底的最低甲醛溶液浓度为2.5‰,离心抗原灭活彻底的最低甲醛溶液浓度为1.5‰,浓缩抗原灭活彻底的最低甲醛溶液浓度为2.0‰。通过对2.5‰甲醛溶液灭活的未处理抗原、1.5‰甲醛溶液灭活的离心抗原和2.0‰甲醛溶液灭活的浓缩抗原保存一个月、二个月、三个月、四个月、五个月的HA检测和配制油乳剂苗后的物理性状检测、安全检验和免疫抗体HI检测试验结果对比得出:在五个月保存时间内,浓缩抗原的质量稳定,免疫效果良好。浓缩抗原的HA的算数平均数比离心抗原平均高1个滴度,比未处理抗原平均高3.6个滴度;配制的油乳剂苗稳定、安全,对鸡体接种免疫产生的抗体HI的算数平均数比离心抗原平均高1.08个滴度,比未处理抗原平均高3.36个滴度,且免疫抗体整齐。由此得出:采用离心和浓缩技术,可以提高禽流感病毒抗原的质量,同时,抗原浓缩成倍体积,为今后抗原的有计划储备,灭活多价苗和多联苗的生产打下了坚实的基础。


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