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南瓜未受精胚珠离体培养体系的优化

陈解放  
【摘要】: 南瓜(Cucurbita moschata D.)又名倭瓜,药用保健功效以及观赏价值高,具有“世界性蔬菜”的美称。我国南瓜的优良品种类型少,更新换代非常慢,相关的育种理论基础严重滞后。为了加快南瓜育种进程,探讨南瓜未受精胚珠诱导的最佳培养条件,本试验以‘试验南瓜1号’为材料,以MS+蔗糖(30.00g·L~(-1))+琼脂(6.00g·L~(-1))+2,4-D(1.00mg·L~(-1))+NAA(0.25mg·L~(-1))+6-BA(0.50mg·L~(-1))为基本培养基,在此培养基的基础上,研究KT预处理和AgNO_3刺激对未受精胚珠诱导的影响。同时运用石蜡切片技术观察四个重要时期胚囊的发育状态并以改良苯酚品红压片法观察根尖染色体,以期为南瓜单倍体的培养和鉴定提供一定的理论支撑。本试验的研究结果如下: 1.南瓜未受精胚珠胚状体的诱导以组合MS+蔗糖(30.00g·L~(-1))+琼脂(6.00g·L~(-1))+2,4-D(1.00mg·L~(-1))+NAA(0.25mg·L~(-1))+6-BA(0.50mg·L~(-1))为宜,胚状体诱导率为3.3%。而此后的分化再生培养基则以MS+蔗糖(30.00g·L~(-1))+琼脂(6.00g·L~(-1))和MS+蔗糖(30.00g·L~(-1))+琼脂(6.00g·L~(-1))+活性炭(1.00g·L~(-1))为佳。 2.试验发现不定芽也能发育成正常植株,但比率很低,只有0.3%~6.7%,而胚状体发育成正常植株的比率高达70%以上。 3. AgNO_3刺激对南瓜未受精胚珠不定芽的分化具有促进作用,最佳浓度为16mg·L~(-1)。KT预处理对南瓜未受精胚珠的不定芽的发生具有抑制作用,这种抑制作用在开花当天的未受精胚珠上最为明显,使其出芽率从50%降到了3.3%,对其他两个接种时期未受精胚珠的抑制作用稍减。另外KT预处理和AgNO_3刺激均对未受精胚珠胚状体和小苗的诱导具有抑制作用。 4.开花前三天的子房处于单核胚囊时期;开花前两天的子房处于双核胚囊时期;开花前一天的子房处于四核胚囊时期;开花当天的子房处于七细胞八核的成熟胚囊期,其胚囊为蓼型胚囊。处于成熟胚囊期也即开花当天的未受精胚珠,其胚状体诱导率、成苗率均高于开花前一天和开花前两天这两个时期的未受精胚珠。 5.上午10:00取材,4℃冷水处理24h后用卡诺固定液固定24h,再用1mol·L~(-1)盐酸60℃水浴解离7min,最后用改良苯酚品红染色10min,镜检。用此方法处理的细胞染色体清晰,易于进行观察,计数。观察‘试验南瓜1号’的染色体条数为2n=44条。


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