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君迁子的遗传多样性和SSR-PCR分子标记分析

张庆丽  
【摘要】:本研究结合物候期观测,对47份雌株君迁子(Diospyros lotus L.)和60份雄株君迁子种质资源进行表型性状的观测,并对结果进行聚类分析,采用了SSR-PCR分子标记技术优化反应体系、筛选引物的前提下分别对47株雌株君迁子和60株雄株君迁子种质资源的亲缘关系和遗传多样性进行了聚类分析,旨在通过对君迁子种质资源的表型性状和基因组DNA的分子标记,探讨和分析君迁子种质资源单株之间的亲缘关系和遗传差异性,主要得出以下结论:(1)通过对47份雌株君迁子和60份雄株君迁子的表型性状的统计分析,雌株的果实纵径、果实横径、果形指数、种重、果色的变异系数为11.05%、12.35%、11.96%、16.24%、20.98%、96.11%、21.04%以及雄株的花蕾和花药的长宽比的变异系数为11.71%和10.17%,均大于阀值10%,说明君迁子种质资源的单株之间存在较大形态差异。此外还分别对雌株的果实和种子及雄株的花蕾、花粉、花药的长、宽、长宽比值进行了聚类分析,结果进一步说明,君迁子在表型性状性状方面存在较大差异。(2)优化SSR-PCR分子标记技术,建立最优反应体系为10×PCR buffer2.0μL,50ng/μL模板DNA 1μL,25mmol/L Mg2+1.5μL,2.5mmol/L dNTPs1.5μL,上下游引物各1μL,5U/μL Taq DNA聚合酶0.4μL,剩余部分双蒸水补齐,反应的总体积为20μL。(3)试验从50对SSR引物中,雌株筛选出25对,雄株筛选出20对多态性高,条带清晰且丰富的引物,各类群内的遗传相似系数范围为0.4850-0.8149(A类),0.5808-0.8149(B类),0.1785-0.5013(DΙ类),0.6154-0.8269(DI类),0.5865-0.8077(E类),0.6058-0.7692(F类),结果表明各类群单株间变异丰富。(4)利用UPGMA法对君迁子种质资源进行聚类,结果显示,君迁子雌雄株群体间的遗传距离较大,雌株群体在相似系数0.67的水平,可以将君迁子雌株47棵单株群体分为A、B、C三类,其中C类为雌14单独聚为一类,果子较大,果实颜色鲜艳,成熟期较早,雄株在相似系数0.662的水平,可以将君迁子雄株60株单株群体分为D、E、F三类,F类群体的花蕾、花药、花粉相对来说发育较晚且小。聚类结果表明,样品间的相似系数与样品的表型性状有一定关系。


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