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温厚朴的现代炮制加工及UPLC-DAD-TOF-MS指纹图谱研究

王麟  
【摘要】:目的:厚朴(Cortex Magnoliae Officinalis)为一常用中药,收载于2005版《中国药典》。温厚朴作为厚朴的道地药材之一,主产于浙江,为厚朴的主要来源之一。本研究针对于目前温厚朴炮制工艺研究和应用不尽完善,药材和炮制品的质量控制手段有待提高等问题,对温厚朴的最佳炮制工艺进行研究,并建立温厚朴药材及其炮制品的UPLC-DAD-TOF-MS指纹图谱质量控制方法。 方法:首先对姜汁闷润方法进行单因素实验优化,而后对姜炙、姜煮、姜烘和姜汁微波法四种炮制方法分别利用正交设计进行优化,比较优化后的各种方法炮制品中有效成分厚朴酚与和厚朴酚的总含量,从而确定一种温厚朴的最佳炮制工艺。利用SPME-GC-MS技术,对温厚朴药材及其最佳工艺炮制品的挥发性成分进行分析,确定其成分类型、结构及相对含量,研究最佳工艺炮制前后挥发性成分的组成变化趋势。采用UPLC-DAD-TOF-MS技术,对来自浙江省5个不同产地2个不同植物来源的温厚朴药材及其最佳工艺炮制品进行指纹图谱研究,对指纹图谱数据进行相似度分析、聚类分析和判别分析,从而分别建立温厚朴药材及最佳工艺炮制品的指纹图谱质量控制方法。 结果:通过比较,确定了闷润的最佳时间为60min,最佳姜汁的体积与药材的用量比为60 L/100 Kg药材;四种炮制方法经优化后的含量结果为姜汁微波法(31.95 mg·g-1)姜烘(31.79 mg·g-1)姜煮(30.55 mg·g-1)姜炙(29.72 mg·g-1)市售(20.07 mg·g-1),结果差别不大,结合企业生产实际,确定最佳炮制工艺为优化后的姜煮法。SPME-GC-MS对挥发性成分的分析结果显示,炮制前后挥发油的组成成分类型基本一致,但含量不同,除异柠檬烯(isolimonene)炮制后绝对含量和相对含量升高外,其他组分绝对含量在炮制后均呈现不同程度的降低且炮制前后挥发油的成分组成比例发生明显变化。通过对来自浙江省5个不同产地2个不同植物来源的温厚朴药材及其最佳工艺炮制品进行指纹图谱分析,确定药材和最佳工艺炮制品的相似度标准分别为0.95和0.93。聚类分析显示样品可按植物来源聚为两类,判别分析分别建立了药材和最佳工艺炮制品植物来源的判别方法,其交叉验证结果准确率达100%。同时利用高分辨质谱对部分共有峰进行了成分的确认。 结论:本课题建立了温厚朴的最佳炮制方法,总结了最佳炮制工艺对温厚朴挥发性成分的影响规律,并分别建立了药材和最佳工艺炮制品的UPLC-DAD-TOF-MS指纹图谱质量控制方法,同时利用统计分析的手段,分别建立了快速可靠的药材和最佳工艺炮制品的植物来源鉴定方法,为温厚朴的深入研究提供了一定的参考。


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