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蛛网膜下腔出血大鼠海马中P38表达及学习记忆关系的研究

郭志波  
【摘要】:目的建立蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage, SAH)Sprague-Dawley(SD)大鼠模型,采用避暗试验方法测试SAH模型大鼠学习记忆功能,检测突触素(Synaptophysin, P38)在SAH模型大鼠海马中表达,探讨P38与学习记忆之间的关系。方法1. SAH SD大鼠模型建立与学习记忆性研究健康雄性SD大鼠120只,随机分为空白对照组,SAH模型假手术组,SAH模型组,SAH模型组分1d组,7d组,30d组等3个亚组,模型组手术注入取自自身尾动脉血液,假手术组进行同样手术,注入生理盐水代替血液,3组大鼠同环境饲养。观察大鼠行为学改变,采用避暗试验方法记录每只大鼠实验潜伏期(latentperiod, LT)以及来回穿梭次数(EN),研究学习记忆能力。2.研究各个实验组海马组织中P38的表达并探讨与学习记忆的关系各实验组大鼠均采用单笼饲养,饲养环境相同,避暗试验检测后,无痛处死。SAH模型组每亚组于1d,7d,30 d时行避暗实验后无痛处死大鼠,模型组每亚组取大鼠n=24只,假手术组及空白对照组取n=24只;检测P38mRNA及蛋白表达。模型实验组大鼠2/3用乙醚麻醉断头,无RNA酶试验台内快速取出海马,并液氮冷藏后迅速移至-80℃冰箱备用,另1/3经吸入乙醚后用4%多聚甲醛灌注、蔗糖梯度脱水后,应用OTC(Sakura,USA)包埋固定,-80℃冰箱保存以备组织切片用。应用免疫组化、RT-PCR和Western blot等技术方法研究SAH模型大鼠海马P38mRNA及相关蛋白的表达并探讨与学习记忆的关系。结果1.SAH模型大鼠制作成功后大鼠有认知改变表现模型制作成功率为97.3%。空白组大鼠避暗试验结果LT为(53.00±3.74s)、EN为(3.55±1.51次);假手术组避暗试验结果LT为(53.14±3.11s)、EN为(3.55±1.51次);模型组:模型成功后1d组避暗试验结果的LT为(37.86±3.57s)、EN为(5.71±0.49次);SAH模型7d组避暗试验结果为LT(44.51±1.28s)、EN为(4.35±1.19次);SAH模型30d组避暗试验结果(51.73±3.62s)、EN为(3.89±1.07次);SAH模型组大鼠与对照组比学习记忆能力明显下降(P0.05或P0.01),组间对比,模型组大鼠1d、7d、30d组认知功能逐渐增强,有统计学意义(P0.05或P0.01),但均较正常组差,比值均有统计学意义(P0.05,P0.01)。2.分子生物学检测显示(1)免疫组织化学检测结果:假手术组P38免疫阳性细胞数与空白对照组之间无显著差异;SAH模型组P38免疫阳性细胞数与空白对照组、假手术组均有明显差异性(P0.01);且SAH模型1d组P38免疫阳性细胞数明显低于SAH模型30d组(P0.01)。(2)RT-PCR结果:紫光灯下,Marker的目的条带清晰可见,通过测定各条带P38的相对光密度值与内参的比值的比较,假手术组P38mRNA表达与空白对照组之间无显著差异;与假手术组相比,SAH模型组P38mRNA表达显著降低(P0.01);且SAHld组、SAH7d组和SAH30d组P38mRNA表达呈递增趋势,三组之间差异有显著性(P0.01)。(3) Western blot结果:各组大鼠海马组织中均有P38蛋白表达,在标准蛋白分子参照物Marker的对照下,通过测定各目的条带的光密度值,与管家基因蛋白比值比较,假手术组P38蛋白表达与空白对照组之间无显著差异;SAH模型组P38蛋白表达与假手术组相比显著降低(P0.05或P0.01);且SAH1d组、SAH7d组和SAH30d组P38蛋白表达呈递增趋势,三组之间差异有显著性(P0.05或P0.01)结论1.蛛网膜下腔出血可使大鼠学习记忆认知功能受损。2.蛛网膜下腔出血大鼠海马组织中P38表达的变化可能是其学习记忆受损的分子机制之一。


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