多胺类化合物WJ01对PC12细胞拟缺血性损伤的保护作用及其机制研究

【摘要】：目的:探讨多胺类化合物(polyamine analogues ,WJ01)对缺氧缺糖,天然多胺(putrescine,Put)和谷氨酸(glutamate,Glu)诱导的PC12细胞(大鼠嗜铬细胞瘤细胞,pheochromocytoma cell)损伤的保护作用及其机制。 方法:运用不同的方法造成PC12细胞损伤模型,通过倒置显微镜观察细胞的形态,MTT法检测PC12细胞存活率,研究多胺类化合物的细胞保护作用;采用吖啶橙(Acridine Orange,AO)和溴化乙锭(Ethidium bromide,EB)双染色法观察细胞凋亡形态和特征;用DCFH-DA检测细胞内ROS的水平,罗丹明123(Rh123)染色法测定细胞线粒体膜电位的变化;用钙离子敏感的荧光探针Fura-2/AM检测细胞内游离Ca~(2+)浓度;从而进一步研究多胺类化合物的细胞保护作用的可能性机制。 结果:1.经缺糖缺氧培养后,细胞存活率显著降低,多胺化合物能明显改善受损细胞形态,显著提高MTT值及细胞存活率,对连二亚硫酸钠造成PC12细胞缺氧损伤表现出保护作用。2.天然多胺可诱导PC12细胞损伤,提高细胞内的ROS水平,增加细胞内Ca~(2+)内流,降低线粒体膜电位,多胺类化合物可改善细胞形态,提高细胞存活率,降低ROS水平,减少细胞内Ca~(2+)内流,抑制线粒体膜降低,减少细胞凋亡。3.经谷氨酸毒性损伤,多胺类化合物可改善细胞形态,提高细胞存活率,减少细胞内Ca~(2+)内流,降低ROS水平,抑制线粒体膜降低,减少细胞凋亡。 结论:通过离体实验证明多胺类化合物对缺氧缺糖、天然多胺及谷氨酸诱导的PC12细胞损伤有保护作用,为进一步揭示其对脑缺血损伤的作用机制提供依据。