收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

胰腺炎相关蛋白基因(pap)对大鼠肝再生的作用研究

申亚慧  
【摘要】:胰腺炎相关蛋白(PAP),是从胰腺炎患者的胰液中发现的一种炎症蛋白,有促进有丝分裂、抗细胞凋亡、抗炎症和促进细胞与胞外基质粘附等作用。为揭示其在肝再生中的作用,本文根据大鼠pap基因的mRNA序列,采用分子克隆的方法克隆出pap基因。在此基础上设计干涉片段并构建出pap基因的两个干涉载体pGenesil-1.0-pap(289)和pGenesil-1.0-pap(485),三个检验载体pGenesil-1.0-pap(289)-pap、pGenesil-1.0-pap(485)-pap和pGenesil-1.0-HK-pap,并通过尾静脉液压转基因方法检测各检验载体的作用,筛选出最佳干涉载体pGenesil-1.0-pap(485)。采用脂质体转染法将pEGFP-N1-pap及对照pEGFP-N1,pGenesil-1.0-pap(485)及对照pGenesil-1.0-HK等4种质粒转入肝癌细胞BEL-7402内,再用G418筛选出稳定转染细胞株,并进行以下检测:采用活体观察和HE染色观察细胞形态结构;细胞计数和MTT法测定细胞的生长曲线;PCNA细胞免疫化学检测细胞增殖;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;甲基纤维素半固体培养基检测集落形成率;药物MTT法检测细胞的耐药性。为进一步研究pap对肝再生的作用奠定基础,也为揭示肝再生的分子机制提供信息。体内实验采用液压转基因技术将pEGFP-N1-pap及对照pEGFP-N1﹑pGenesil-1.0-pap(289)和pGenesil-1.0-pap(485)及对照pGenesil-1.0-HK等5种质粒分别注入2/3肝切除后的大鼠肝脏内,采用常规组织学方法、荧光显微镜技术以及统计学方法等检测转染这些质粒后大鼠的死亡率﹑组织显微结构、肝系数以及肝再生率,以判断pap对肝再生的影响。 体外实验结果表明,转染pEGFP-N1-pap的细胞明显成梭形,细胞核仁增多,与pap融合的绿色荧光蛋白(EGFP)主要分布在细胞核核膜周围,其它转染细胞株形态无明显变化,EGFP主要分布均在细胞核中;生长曲线检测显示转染pEGFP-N1-pap质粒的细胞增殖最快;PCNA细胞免疫化学和hoechst33258染色检测表明稳定转染pEGFP-N1-pap质粒的细胞可能促进细胞增殖、抑制凋亡;集落形成率结果显示稳定转染pEGFP-N1-pap的细胞恶性程度升高;药物MTT检测发现pap基因能促进BEL-7402细胞生长,但对其耐药性无明显影响。体内实验结果表明,转入pEGFP-N1-pap质粒后,有炎症反应发生;在120小时,pEGFP-N1-pap组比对照组的肝系数和肝再生率高,且与对照组相比pEGFP-N1-pap(289)组要比pEGFP-N1-pap(485)组的肝系数和肝再生率高。综上所述,pap基因可能有促进细胞增殖,增加肝癌细胞恶性程度的作用,而对肝癌细胞抗药性没有明显耐药性;pap可能参与促进肝再生进程。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 吴蓉;张隆;华玲;戴俊华;刘丽丽;康向东;;尿液中大肠埃希菌实时荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立[J];检验医学;2011年06期
2 侯玉涛;邝珠芳;柯庆喜;陈章权;;人肥大细胞羧肽酶真核表达重组质粒DNA的免疫原性观察[J];山东医药;2011年26期
3 方潇碧;张春鸿;黄亚;林森;黄振校;吴丽萍;施清圆;李文峰;廖志苏;;重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a的构建与表达[J];实用医学杂志;2011年12期
4 王桂玲;陈薇;姜佩佳;王孝会;;C/EBPα不同截短功能域GST融合蛋白表达载体的构建及表达的研究[J];中国医科大学学报;2011年06期
5 张晓嫒;叶长芸;徐建国;;肠出血性大肠埃希菌O157:H7质粒pO157上毒力因子的研究进展[J];疾病监测;2011年06期
6 陈国武;孟纯阳;蒋电明;胡侦明;;重组真核表达质粒pEGFP/hVEGF_(165)转染兔成骨细胞条件的优化[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年20期
7 魏炎;郏雁飞;郑燕;马晓丽;汪运山;;分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年24期
8 徐燕;周彦;;多药耐药肺炎克雷伯菌9种可移动遗传元件标记研究[J];中华医院感染学杂志;2011年15期
9 陈慧敏;严旺;张顺;;人肌肉生长抑素蛋白原核表达及纯化[J];中国临床神经科学;2011年04期
10 赵银霞;王楷文;杨恒;郑东;苏兆亮;仝佳;王胜军;许化溪;;T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年08期
11 王川;吴润;李发弟;刁小龙;赵春林;王芳;;分子信标实时荧光定量PCR构绵羊PrP基因质粒和标准曲线[J];中国人兽共患病学报;2011年08期
12 张薇;沈权;彭正羽;;NCAM L1小基因模型的建立及其剪接模式研究[J];浙江大学学报(医学版);2011年04期
13 罗远材;瞿全新;糜若然;张灏;;靶向人乳头瘤病毒18E6的短发夹结构RNA慢病毒载体的构建[J];天津医药;2011年09期
14 陈豪;李丹;林纳;黄月红;陈志新;王小众;;乙肝病毒X基因慢病毒载体的构建和鉴定[J];福建医科大学学报;2011年03期
15 程倩;张达矜;刘冬梅;吴祖泽;崔春萍;;pp32在前列腺癌细胞中的作用研究[J];军事医学;2011年08期
16 石艳春;韩堃;毛颖佳;郑源强;;共表达羊布氏菌P39基因与增强型绿色荧光蛋白基因逆转录病毒质粒的构建[J];中国生物制品学杂志;2011年07期
17 于利;;Prestin蛋白的稳定高表达卵巢细胞株的建立[J];天津医药;2011年07期
18 李铁军;刘作金;李生伟;刘长安;屈谦;薛强;龚建平;;X盒结合蛋白1对脂多糖处理的Kupffer细胞炎性因子表达的影响[J];第三军医大学学报;2011年14期
19 于丹丹;王春婷;石华山;;Survivin T34A质粒/脂质体复合物抑制Lewis肺癌实验研究[J];中华临床医师杂志(电子版);2011年10期
20 杨彬;王凤龙;;柯萨奇病毒A组16型的3C蛋白抑制RIG-Ⅰ介导的IFN-β的诱导[J];免疫学杂志;2011年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周利刚;向华;;极端嗜盐古菌隐蔽型质粒pZMX101的研究[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
2 马苏;姜平;段舒怡;李玉峰;;猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性单克隆抗体研制[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
3 吴丛梅;殷玉和;韩依辰;;药用级含IL-24基因质粒提取工艺的研究[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
4 吴淑燕;宋国蓉;眭阳;李嫄渊;吕杰;李琼;黄瑞;;伤寒沙门菌质粒pR_(ST98)与巨噬细胞自噬和凋亡关系的研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
5 朱建国;周杨;段新平;张明军;李莉;王铁东;逄大欣;欧阳红生;;绿色荧光蛋白基因体外转录质粒的构建[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
6 陆正齐;朱灿胜;刘然义;谢发君;胡学强;;质粒pAAV-MCS转导的骨髓间充质细胞导向的CNTF基因靶向性治疗慢性进展型多发性硬化[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年
7 胡晓敏;袁永明;袁志明;;苏云金杆菌杀虫质粒在敏感昆虫体内体外的结合转移研究[A];第十届全国杀虫微生物学术研讨会暨全国生物农药与化学生物学研究与产业化会议论文摘要集[C];2006年
8 程时丹;王晓瑾;乔敏敏;周季兰;吴云林;;Smad4基因抑制人类胃癌细胞株生长作用的实验研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
9 耿春银;李德莉;刘佳佳;陈大雷;杨连玉;;猪Ghrelin基因质粒对小鼠的促生长效应研究[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
10 尹志康;吴小候;罗春丽;何云锋;刘川;杜虎;;TGF-β1基因特异性shRNA真核表达载体的构建及其基因抑制作用[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 梁小燕;抑癌基因LKB1调控细胞周期分子机制研究[D];重庆医科大学;2010年
2 徐元喜;Cytophaga hutchinsonii遗传操作体系的建立及应用[D];山东大学;2012年
3 徐娟;肠道病毒EV71 VP1基因的优化和免疫原性的研究[D];南京医科大学;2011年
4 杨波;阻断TGF-β信号通路增强NK-92细胞过继性治疗的抗肿瘤效应[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
5 王荫榆;有关乳酸菌质粒和表达体系的研究[D];复旦大学;2003年
6 马永平;含质粒人两歧双歧杆菌的分离、质粒测序和生物信息学分析[D];重庆医科大学;2005年
7 孙江滨;重组Psilencer1.0-U6-siRNA-STAT3对动脉化静脉壁内膜异常增生抑制作用的实验研究[D];吉林大学;2010年
8 赵旺;肌细胞增强因子2A基因突变调控血管平滑肌细胞机制及干预研究[D];中南大学;2010年
9 郭素霞;苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1518新型杀线虫晶体蛋白基因分离的新策略[D];华中农业大学;2008年
10 兰世杰;BCCIP相互作用蛋白的鉴定与功能研究[D];吉林大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 董流昕;转基因抗草甘膦大豆参比分子的构建[D];北京林业大学;2005年
2 曹鹏;人脑胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)原核表达载体的构建及蛋白表达的鉴定[D];第二军医大学;2009年
3 胡伶俐;牛杀菌—通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建及其在大肠杆菌中表达[D];华中农业大学;2010年
4 申亚慧;胰腺炎相关蛋白基因(pap)对大鼠肝再生的作用研究[D];河南师范大学;2012年
5 佘其美;TNF-α、胰岛素和地塞米松对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞PPAR-γ2mRNA表达的影响[D];安徽医科大学;2005年
6 牛牛;COX-2基因和肺癌相关性研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2006年
7 田海山;酸性成纤维细胞生长因子发酵工艺的优化[D];吉林大学;2007年
8 蔡燕飞;P-糖蛋白mRNA中IRES序列分析及与肿瘤多药耐药性关系研究[D];江南大学;2011年
9 高卓;侧脑室注射质粒pLXSN介导Bcl-2基因对大鼠脑梗塞及BDNF影响的研究[D];中国医科大学;2004年
10 黄强;犬经皮插管肾动脉注射人HGF基因的实验研究[D];南京医科大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 刘霞;美利用质粒制造诱导多功能干细胞[N];科技日报;2009年
2 农业部饲料工业中心 陆文清博士;使用饲用抗生素危害到底有多大[N];中国畜牧兽医报;2005年
3 Wang Johson译;非病毒游离质粒基因载体技术获美国专利[N];中国高新技术产业导报;2002年
4 直尺编译;健康新武器——D N A疫苗[N];科技日报;2002年
5 卢苏燕;研究显示鼠疫杆菌有向抗多药性发展的危险[N];医药经济报;2007年
6 吴一福;PTFE血管材料可携载VEGF基因转染[N];中国医药报;2006年
7 付毅飞;建造极端微生物“细胞工厂”[N];科技日报;2004年
8 ;放线共生放线杆菌黏附性研究[N];科技日报;2006年
9 陆志城;安普霉素让抗生素寿命延续[N];医药经济报;2004年
10 丁香;基因工程让蘑菇成为制药厂[N];中国医药报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978