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PDGF-BB通过SRC-JAK2信号通路促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化

周云凤  
【摘要】:目的:检测Src,JAK2在MC3T3-E1细胞中是否表达及它们是否处于上下游关系,以及是否可以被PDGF-BB激活,PDGF-BB是否可以通过Src-JAK2信号通路促进MC3T3-E1细胞的成骨向增殖及分化。方法:首先,采用Western blot检测Src,JAK2在MC3T3-E1细胞中的表达和PDGF-BB对它们的作用。然后同样用Western blot检测Src,JAK2在MC3T3-E1细胞中的位置关系。再运用CCK-8试剂检测PDGF-BB对MC3T3-E1细胞增殖的影响,并用PDGFRβ,Src,JAK2的抑制剂AG1295,SU6656,AG490检测Src-JAK2信号通路在PDGF-BB对MC3T3-E1细胞增殖影响中的作用。接着用 Real-time PCR 和 Western blot 检测 PDGF-BB 是否可以促进 MC3T3-E1 细胞的成骨向分化,用PDGFRβ,Src,JAK2的抑制剂AG1295,SU6656,AG490检测Src-JAK2信号通路在PDGF-BB对MC3T3-E1细胞分化影响中的作用。最后用ALP染色及茜素红染色检测在PDGF-BB的作用下,MC3T3-E1细胞的成骨向分化及矿化,同样用PDGFRβ,Src,JAK2的抑制剂AG1295,SU6656,AG490检测Src-JAK2信号通路在PDGF-BB对MC3T3-E1细胞成骨向分化及矿化影响中的作用。结果:MC3T3-E1细胞中表达Src,JAK2,而且在30min以内,PDGF-BB以时间依赖性的方式激活Src,JAK2。在MC3T3-E1细胞中,Src位于JAK2的上游。由此可以证明,PDGF-BB能够激活MC3T3-E1细胞中的Src-JAK2信号通路。PDGF-BB可以促进MC3T3-E1细胞的增殖,并且AG1295,SU6656,AG490抑制了 PDGF-BB的促进作用。同样发现,PDGF-BB能够促进MC3T3-E1细胞成骨相关基因如Runx2,Osterix,OCN,OPN,Col1α1,及相关蛋白如Runx2,Col1α1的表达,并且促进成骨细胞的矿化。AG1295,SU6656,AG490抑制了 PDGF-BB促进MC3T3-E1细胞成骨向分化及矿化的作用。结论:PDGF-BB能够通过Src-JAK2信号通路促进MC3T3-E1细胞的增殖及分化。


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