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氯胺酮对小鼠海马缺血再灌注诱导相关基因表达影响

肖峰  
【摘要】:目的 本实验观察了氯胺酮对小鼠海马经历缺血再灌注后相关基因iNOS、c-Jun和凋亡调节基因Bax、Bcl-2以及核转录因子NFκB表达的影响,以探讨氯胺酮对缺血再灌注损伤的脑保护作用及其机制,为临床应用氯胺酮保护脑提供一定的理论依据。 方法 本研究包括:① 小鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立,选用纯种昆明雄性小白鼠60只,体重32~40克,栓线法,即将头端加热成光滑球面的3/0尼龙线插入颈外动脉,经颈总动脉分叉部沿颈内动脉进入颅内至大脑中动脉开口处,阻断大脑中动脉血流,2小时后将栓线的线头抽至颈外动脉残端内,恢复大脑中动脉的血流。② 动物分组:30只小鼠用于脑损伤后神经功能缺陷评分和脑梗塞体积的测定。S组(n=7)为假手术组,在颈总动脉分叉处远端结扎并切断颈外动脉。C组(n=8)为缺血再灌注损伤对照组,通过切断的颈外动脉放置线栓经颈内动脉阻断大脑中动脉血流,同时夹闭同侧颈总动脉2小时后抽线恢复脑血流。I组(n=8)为缺血后氯胺酮治疗组,线栓成功后经腹腔内注射氯胺酮(100mg/kg),2小时后恢复大脑中动脉的血流。R组(n=7)为缺血再灌注后氯胺酮治疗组,在恢复大脑中动脉的血流后经腹腔内注射氯胺酮(100mg/kg)。另30只小鼠用免疫组织化学方法检测海马区iNOS、c-Jun、Bax、Bcl-2和NFκB的表达,分组同前。③ 采用Longa及Bederson的方法进行神经功能缺陷评分。④ 用红四氮唑(TTC)染色15分钟,用Leica-Q500彩色图像分析系统测定梗塞灶的体积。⑤ Nissl染色光镜下观察神经细胞的形态改变。 结果 ① 秩和检验显示C组与I组和R组之间神经功能缺陷评分差异明显(P均<0.05)。② 小鼠脑梗塞灶主要出现在额顶背外侧皮质、海马区、齿状回。R组小鼠的脑梗塞体积明显小于I组、C组(P均<0.01)。③ S组、C组与I组和R组比较海马区iNOS基因表达有显著差异(P均<0.05)。C组、I组海马区c-Jun基因表达增强,C组与S组、I组、R组间和I组与S组、R组间有显著差异(P均<0.05)。C组、I组海马区Bax基因表达增强,C组与S组、R组间有显著差异(P均<0.05),I组与S组有显著差异(P<0.05),I组与R组无显著差异(P>0.05)。I组、R组海马区Bcl-2 基因表达增强,I组、R组与S组和C组间有显著差异(尸均0 .05)。C组、工组、R 组三组间海马区核转录因子NF KB表达无显著差异(尸均0.05)。④NisSI染色可 见C组海马区神经细胞内尼氏小体稀少且分布不均,I组和R组神经细胞内尼氏小体 较S组轻度减少。 结论①氯胺酮能减少缺血再灌注时脑梗塞的体积,减少神经细胞的坏死。②氯 胺酮能明显减少脑缺血再灌注损伤时iNOS和c一Jun基因蛋白的表达,显著抑制了促 凋基因Bax的表达,促进抑凋基因B。1一2的表达,减轻神经细胞坏死和抑制神经细胞 异常凋亡,具有脑保护作用。③氯胺酮未明显激活核转录因子NF KB表达,但核转录 因子NF KB与各个基因之间的确切关系还有待进一步研究。


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