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麻疹病毒通过受体SLAM对昆虫细胞的感染及其诱发细胞凋亡的机制研究

刘鑫  
【摘要】:已经证明淋巴细胞信号刺激因子SLAM(signaling lymphocytic activation molecule)是麻疹病毒的第二受体。我们在苜宿银线夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)的极晚期启动子Ppolh下游,插入编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的报道基因,构建了一种来源于杆状病毒的载体——Bacmid-egfp。利用这种带标记的重组杆状病毒感染Sf9细胞,强烈的绿色荧光说明重组杆状病毒的感染。并且,因为不是与外源基因在同一个启动子下,杆状病毒表达系统中EGFP表达对该系统没有影响。我们在Bacmid-egfp中插入Ppol控制的麻疹病毒(measles virus,MV)细胞受体SLAM基因,构建重组杆状病毒rv-egfp-SLAM。在昆虫细胞Sf9中,得到融合有六个组氨酸标签的SLAM,分子量大约为46kD。HPLC证明,经过镍柱纯化的SLAM为比较单一的蛋白。激光共聚焦证明,使用重组杆状病毒表达的SLAM定位在Sf9细胞膜表面。用纯化的蛋白做pull down,发现它可以与麻疹病毒的血凝素H蛋白相互作用,证明杆状病毒表达的SLAM可能具有麻疹病毒受体的功能。 进一步的实验证明,当用麻疹病毒感染表达SLAM蛋白的Sf9细胞时,我们可以观察到细胞融合,而且细胞的融合程度与麻疹病毒的感染复数成正相关。在mRNA水平,我们检测到麻疹病毒H基因在Sf9细胞中的转录。免疫细胞组化结果显示了麻疹病毒在SLAM-Sf9细胞中的复制。最后,流式细胞检测说明,麻疹病毒可以诱发表达


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