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SARS冠状病毒S基因片段保守性高抗原性C区基因DNA疫苗的免疫学特性研究

袁娴芬  
【摘要】:目的 构建抗原基因为SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)S蛋白C端片段基因的DNA疫苗,采用肌肉注射的方法接种小鼠后观察机体产生免疫应答的情况,为预防和治疗非典型性肺炎提供新的治疗手段。方法 将SARS冠状病毒S蛋白C端811bp-1221bp基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),将重组真核表达载体注射入实验组BALB/c小鼠肌肉中并随循环系统在体内重新分布,导入动物体细胞后,转染细胞所表达的抗原能刺激机体诱导产生强大的体液免疫和细胞免疫反应。同时设空载体pcDNA3.1(-)和生理盐水对照组,定期Elisa检测各组小鼠血清中SARS-CoV的病毒特异性IgG抗体水平,流式细胞仪观察其淋巴细胞表型变化,PCR法检测质粒分布。结果 SARS病毒S蛋白的特异性IgG ELISA结果:免疫后的小鼠摘取眼球获得外周血并分离血清,用纯化GST-Sc融合抗原包被的微孔板进行ELISA测定血清SARS-CoV IgG的效价,结果显示肌注重组DNA的小鼠血清在接种15天后就可检测出SARS-CoV特异性IgG,抗体滴度达1∶500,至第30天时,这种特异性IgG水平进一步上升至1∶1000,至第45天时特异性IgG水平基本保持稳定。而接种pcDNA3.1(-)空载体和生理盐水的对照组均未检测出明显的特异性抗体,且这种低水平的抗体无时-效关系。流式细胞仪测量淋巴细胞的表型变化:注射15天后,流式细胞仪测量淋巴细胞的表型变化,疫苗注射组血清中淋巴细胞表型变化为CD4%∶41.44±1.20 CD8%∶10.96±1.33 CD3%∶59.71±0.99 CD4/CD8∶3.78±3.65;而同时空白组小鼠血清中淋巴细胞表型为CD4%∶38.25±2.00 CD8%∶7.63±0.32 CD3%∶43.57±2.23 CD4/CD8∶5.17±1.36与空白组相比,疫苗注射组以CTL为主的CD8~+T淋巴细胞的百分比含量增加显著,说明DNA疫苗的肌肉注射引起了机体强大的细胞免疫反应。PCR法鉴定质粒在小鼠体内分布∶扩增产物的琼脂糖电泳结果表明,在胫前肌、肝脏中都有质粒存在,而脾脏、肺部淋巴结中未观察到质粒分布。结论 抗原基因为SARS冠状病毒S蛋白C端片段的DNA疫苗可以通过肌注诱导小鼠产生针对SARS病毒强大的细胞免疫应答和体液免疫应答,有可能被开发成为有效的预防SARS病毒感染的新型药物。


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