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单细胞凝胶电泳检测大鼠死后肝、脾细胞核DNA降解与死亡时间关系的研究

何远  
【摘要】:目的 应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测大鼠死后肝、脾细胞核DNA降 解与死亡时间的一般规律,为早期死亡时间的推断提供新的方法;同时比较该方 法与图像分析技术(IAT)推测死亡时间的敏感性。 方法 用颈动脉慢性放血的方法建立大鼠死亡模型。1)在大鼠死后0~30h及 0~27h内,每隔3h,分别对肝组织及脾组织取材,并制作单细胞悬浮液;然后进 行单细胞凝胶电泳,用共聚焦显微镜摄取彗星图像,应用彗星图像分析软件 (IMI1.0)进行图像分析,并用统计软件SPSS11.5作统计学分析。2)同时,在 0~63h,对肝、脾组织取材进行Feulgen染色,用图像分析技术检测死后不同时间 点各组织细胞DNA的含量,用统计软件SPSS11.5进行方差分析。 结果 1、大鼠死后,肝细胞、脾细胞在电泳图像上出现了明显的彗星形拖尾, 其尾长(TL)、尾矩(TM)在一定的时间范围内,即肝细胞在0~18h、脾细胞在 0~15h,组间均有显著性差异;其值随死亡时间的延长而逐渐增大,二者均与死亡 时间(PMI)呈现一定的相关回归关系; 2、大鼠死后,用IAT检测各组织细胞的DNA含量,肝组织的检测指标ID、 IOD在6h,AOD在9h之内,脾组织的检测指标ID、AOD在6h,IOD在3h之内, 均与0h没有显著性差异。 结论 1)单细胞凝胶电泳技术可应用于早期死亡时间的推断;2)对于较早期 死亡时间点的推断,SCGE比IAT更敏感;3)彗星图像分析软件为SCGE的结果 分析提供了便利。


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