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RNA干扰下调cyclin T1蛋白的表达及其对靶细胞和HIV-1的影响

李朝阳  
【摘要】:RNA干扰(RNAi)是一种由小干扰RNA(siRNA)介导的靶序列特异性RNA降解机制,现在它不仅被当作一种研究工具,还可以用作一种抑制病毒感染的基因治疗策略。在哺乳动物细胞里,基于小发夹RNA(shRNA)的RNA干扰技术可以成功下调细胞或者病毒基因的表达。 我们在HeLa,293T以及U373-MAGI-CCR5e细胞中表达靶向细胞内cyclin T1蛋白的shRNA表达质粒后,发现表达质粒CT-4可以特异的下调细胞内cyclin T1蛋白的表达。同时,我们的结果显示cyclin T1蛋白的下调水平跟转染的shRNA表达质粒的剂量以及转染的时间都有一定的正相关性。 CDK9/cyclin T1这一复合物在细胞内的活性不依赖于细胞周期,其作用是参与转录的延伸。这表明作为这个复合物的一个亚单位的cyclin T1对细胞的存活是至关重要的。但是,我们的实验表明在培养的细胞系中,下调cyclin T1蛋白的表达既没有诱导宿主细胞产生凋亡,甚至没有影响细胞周期的变化。我们的结果与刚刚报道的下调P-TEFb的表达没有引起细胞死亡相一致。在细胞水平,cyclin T1将会是一个很好的抑制HIV-1复制的细胞内靶位点。


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