丙型肝炎病毒NS4B蛋白的功能

【摘要】：丙型肝炎病毒(HCV)是引起丙型肝炎的病原体,已成为世界范围内的公共健康问题,是慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要原因。尽管还没有合适的细胞可培养HCV,但它编码的蛋白质在体内和体外己被鉴定。HCV编码一个多聚蛋白,在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下,产生至少十个不同的蛋白,分为结构蛋白(core、E1、E2)和非结构蛋白(NS2-NS5B)。目前对HCV的研究集中于单个的HCV蛋白的功能,试图揭示HCV的致病机制。 在HCV编码的所有蛋白中,NS4B的功能最为不清楚。本研究旨在研究NS4B的功能,了解其在HCV致病中的作用。常规的研究基因的方法常常费时且范围有限。DNA微点阵技术为检测基因的表达水平提供了前所未有的视角,从而发现蛋白在复杂的调节网络中的作用。 用pCDNA3.1(-)和重组的pCDNA3.1(-)NS4B质粒转染HeLa细胞,用G418筛选稳定转染了质粒的细胞,用RT-PCR和western blot分析证实了NS4B能在HeLa细胞中表达,对照没有。然后用微点阵技术在HeLa细胞中分析NS4B对2308个信号途径相关的基因的影响,为了避免错误,同一份标本自身杂交和重复实验,证明有很好的重复性;并且选择杂交信号的比值,如Cy5/Cy32.5的基因视为被NS4B诱导;如Cy3/Cy52.5的基因则视为被NS4B抑制。有90个基因符合这个标准,其中34个基因被上调,56个基因被下调。在34个基因上调基因中,NPTXl的改变达到14.44倍,Dickkopf homolog 1(DKKl),syndecan 1(SDC1),AP1的表达改变均超过5倍。10个下调最为显著的基因为:AKRlCl,IL10RA,substance K,TGFβ,leukemia inhibitory factor receptor(LIFR),H factor(complement)-like 3(HFL3),fibronectin 1(FNl),adducin 3(gamma)inase-like 3(DP-YSL3)。这些基因的表达改变超过8倍。为了了解这些基因的功能,将它们分为7类:(1)肿瘤相关的基因;(2)