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针对HIV-1 B’亚型首株SHIV及减毒痘苗病毒载体重组疫苗的构建

庄柯  
【摘要】:在中国中部地区的河南省及其周边省份,艾滋病在该地区的有偿献血人群(PBDs)中爆发流行,并且向普通人群扩散。我们已发现该地区有33名儿童通过母婴传播途径感染了HIV-1,在没有给予任何干预措施的条件下,该地区HIV-1母婴传播率为38.4%(33/86)。通过分子流行病学调查发现在PBDs中流行的HIV-1主要是B’亚型[1],这一亚型已成为在中国流行的另一主要的HIV毒株。我们从一位河南HIV感染者体内分离到早期的HIV-1_(O2HNsmx2),通过序列分析证明tat/rev/vpu/env的开放阅读框是完整的。通过细胞融合实验分析发现病毒具有R5嗜性。用该B’亚型毒株的tat/rev/vpu/env替换SHIV_(SF33)基因上HIV-1的相应部分,成功构建了首株R5嗜性的SHIV-B’_WItU。重要的是,该病毒能在中国恒河猴的PBMC中复制并产生较高滴度的病毒。这个结果证明我们已经成功构建了一个新的能有效地在中国恒河猴T淋巴细胞中复制的嵌合病毒SHIV-B'_(wnu),我们期待将来使用SHIV-B'_(WHU)感染中国恒河猴建立一个新的动物模型,使用这个模型研究HIV-1的致病机制,疫苗和抗逆转录病毒药物。 HIV-1在中国的快速传播使研制HIV预防性疫苗的工作迫在眉睫。在前期工作中,我们利用中国特有的痘苗病毒天坛株(VTT)成功建立了一个高度减毒的痘苗病毒载体(TT.WHU.ZCI)。以TT.WHU.ZCI为载体,我们成功构建了三个针对HIV-1 B’的候选疫苗。即分别将HIV-1 B’的gagpol和(或)env基因克隆到一个带有双启动子的载体,通过基因重组将HIV-1 B’的gagpol和(或)env基因引入到TT.WHU.ZCI基因组中。重组病毒rVTT-ZClenv能有效地将env蛋白表达在细胞表面,而通过电镜发现感染rVTT-ZCIgagpol的细胞中有HIV-1病毒样颗粒(VLP),这表明rVTT-ZCIgagpol表达的gag蛋白能进行自我装配形成VLP。我们通过不同的免疫途径和免疫剂量接种重组病毒rVTT-ZClenv到BALB/c小鼠体内,发现肌肉内、皮内和皮下的免疫途径能诱导小鼠产生针对HIV外源蛋白特异性免疫反应。通过体内毒力实验分析发现重组病毒仍然保持病毒载体高度减毒的特性,使一种安全可靠的疫苗。这些结果证明我们首次以新构建的减毒痘苗病毒天坛株为载体构建HIV-1疫苗。这为今后特别针对华中地区流行株HIV-1 B’构建新型,有效的疫苗研究奠定了重要的工作基础。


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