水稻胚胎发生过程中的基因表达分析
【摘要】：水稻作为单子叶植物遗传研究的模式植物,具有许多优势,同时作为重要的粮食作物,研究水稻胚胎发生过程的基因表达变化具有重大的理论和实际意义。本论文通过显微操作分离到大量水稻胚胎,利用RT-PCR技术构建了胚胎cDNA文库,同时结合多种方法对文库进行了筛选,其主要结果分为以下几个部分:
1.通过严格的时间标记和显微操作,分离到大量的水稻胚胎(这三个时期分别是未分化胚胎(即开花后48-50小时hours after flowering,HAF),刚开始分化胚胎(即72-74HAF)和正在分化胚胎(即120-122HAF))。通过RT-PCR方法构建了这三个时期的cDNA文库,对文库分析鉴定的结果显示文库是合格的。同时还大量提取了胚胎文库的质粒,点高密度膜,对文库进行了筛选。
2.由于我们构建的直接cDNA文库中存在大量的冗余基因,所以又根据复性动力学理论,通过变性—复性操作,对以上的三个水稻胚胎的cDNA文库进行了均一化,使它们所含的cDNA的丰度趋于一致,并进一步对这三个均一化的文库进行了高通量的筛选工作,结果证明文库均一化以后提高了筛出率,从而相应提高了工作效率。
3.为了更全面了解胚胎发生的可能机制,我们通过与Syngenta Biotechnology公司合作,使用基因芯片(一种水稻的high-density oligonucleotide probe microarray,它代表了21,000个水稻中已知和预测的基因,几乎覆盖水稻三分之一的全基因组),用这种高通量的研究方法分别对水稻三个时期的胚胎基因表达情况进行了研究。实验结果显示在胚胎发育的不同阶段,有一定数目的基因呈现出差异表达的性质。
4.根据测序结果,设计了大量引物,通过RT-PCR方法,我们大量扩增得到目的差
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