收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

白藜芦醇对恶性黑素瘤抗癌机制的实验研究

李东升  
【摘要】:恶性黑素瘤(MM)是来源于黑素细胞的皮肤恶性肿瘤。尽管近年来MM的基础及临床研究均取得一定进展,但迄今为止,对已经转移的中晚期MM患者仍缺乏有效的治疗药物及方法。深入探讨MM发生发展的内在机制,探寻新的治疗药物及治疗靶点是皮肤病研究工作者面临的挑战。近年来研究表明白藜芦醇对包括MM在内的多种肿瘤细胞均有显著的抑制作用,白藜芦醇可抑制培养的和新鲜分离的MM细胞的增殖,但对其抗肿瘤活性的确切机制尚不清楚。本研究通过体外实验初步研究了白藜芦醇对MM细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及相关机制,进而对MM局部RAS系统诱导血管新生的机制进行了初步探讨,并且通过体外实验观察白藜芦醇对MM细胞局部RAS系统及血管新生的影响。 第一部分白藜芦醇对恶性黑素瘤细胞生长的影响及机制 背景和目的:白藜芦醇是(resveratrol)一种主要存在于种子植物中的植物补体,属于非黄酮类多酚化合物,具有保护心血管、抗炎、调节血脂、抑制血小板聚集等多种功效。近来研究证明其具有确切的抗肿瘤作用,在肿瘤的起始、促进、发展三个阶段均有抑制作用,被认为是最有希望的天然化学防癌剂之一。既往报道白藜芦醇对包括恶黑在内的等多种肿瘤细胞均有显著的抑制作用,近期研究显示白藜芦醇可抑制培养的和新鲜分离的恶黑细胞的增殖,但对其确切机制尚不清楚。本研究通过体外实验观察白藜芦醇对恶黑细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,探讨其抗恶黑细胞生长作用的分子机制,为其作为抗恶黑药物的应用提供理论及实验依据。 方法:采用MTT法检测白藜芦醇对人恶性黑素瘤细胞系A375及小鼠恶黑细胞系B16-F1增殖的影响;Annexin-V/PI双标流式细胞术检测白藜芦醇对A375、B16-F1细胞凋亡的影响,PI单标流式细胞术测定白藜芦醇对A375、B16-F1细胞DNA分布的影响;Western印迹法检测白藜芦醇对A375细胞Bcl-2、Bax、cyclinDl及p21蛋白表达的影响。 结果:白藜芦醇对A375、B16-F1细胞具有明显的抑制增殖作用,其抑制增殖作用呈量效及时效关系。25μmol/L白藜芦醇作用24h即可诱导A375细胞凋亡,其细胞凋亡率为(16.7±2.1)%;100gmol/L白藜芦醇作用24h时B16-F1细胞凋亡率可达(39.6±3.3)%。100μmol/L白藜芦醇作用12h时A375细胞凋亡率为(17.2±1.7)%,作用72h时细胞凋亡率则高达(52.3±4.1)%;相同浓度白藜芦醇作用12h时B16-F1细胞凋亡率为(18.4±1.6)%,作用72h时细胞凋亡率则可达(56.7±4.5)%。白藜芦醇处理组A375及B16-F1细胞周期均发生变化,细胞周期被阻滞于G1期。此阻滞效应随白藜芦醇浓度的增加而增加:25gmol/L白藜芦醇作用24h时A375及B16-F1细胞G1期比例分别为(40.51±3.97)%、(41.34±3.12)%,100μmol/L白藜芦醇作用相同时间时其G1期比例分别为(55.64±4.95)%、(53.93±5.12)%。白藜芦醇明显下调A375细胞抗凋亡蛋白Bcl-2及细胞周期蛋白cyclinDl的表达,同时上调促凋亡蛋白Bax及p21蛋白的表达水平。 结论:白藜芦醇可通过调控细胞周期进程、诱导细胞凋亡而有效抑制恶性黑素瘤细胞生长,其调控细胞周期及诱导细胞凋亡的机制分别与调节细胞周期蛋白cyclinD1/p21及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的表达有关。 第二部分血管紧张素Ⅱ在恶性黑素瘤细胞的表达及对血管新生的影响 背景和目的:传统认为,肾素-血管紧张索系统(RAS)主要功能是对机体的血压和水电解质平衡的调控,近年研究发现许多组织中都存在“局部RAS”,参与机体炎症、纤维化、细胞增殖及凋亡等多种生理及病理性进程。RAS主要效应肽是血管紧张素Ⅱ(AngⅡ), AngⅡ有两种特异性受体:血管紧张素Ⅰ型(AT1R)和Ⅱ型受体(AT2R)。研究证实RAS主要是通过AngⅡ/AT1R途径发挥其生物学活性。近期研究表明,RAS参与部分肿瘤的发生发展,但具体机制未完全阐明。本实验对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在恶黑细胞的表达情况进行了初步探讨,并进一步研究AngⅡ对恶黑细胞血管新生的影响。 方法:分离并培养正常人黑素细胞及原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC),放免法检测人恶黑细胞株A375及人正常黑素细胞培养上清液中AngⅡ的表达水平,体外小管形成实验检测AngⅡ对HUVEC体外小管形成的影响,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测A375细胞分别在AngⅡ及血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)特异性拮抗剂洛沙坦作用前后血管内皮细胞生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。 结果:人恶黑细胞株A375细胞培养上清液中AngⅡ表达水平为37.29±0.27 pmol·L-1,较人正常黑素细胞(21.58±0.32 pmol·L-1)明显增高,差异有显著性(P0.05);AngⅡ能明显诱导HUVEC管状结构的形成,1×10-6mol/L AngⅡ处理后,二维基质胶中HUVEC形成完整的管状结构,其面积明显高于对照组,为对照组2.5±0.3倍,差异有显著性(P0.05);1×10-6mol/LAngⅡ处理后,VEGF及bFGF在A375细胞mRNA及蛋白水平的表达较处理前明显增高,洛沙坦(1×10-6mol/L)作用后则正好相反,差异有显著性(P0.05)。 结论:恶黑存在着局部RAS的表达异常(AngⅡ的超表达),AngⅡ能明显促进恶黑细胞的血管新生,这可能是局部RAS影响恶黑肿瘤发生的机制之一 第三部分白藜芦醇下调局部RAS系统的表达抑制恶性黑素瘤血管新生的实验研究 背景和目的:既往研究及本实验前期研究均表明MM存在有RAS的超表达,过高表达的RAS能明显促进恶黑细胞的血管新生。另有研究表明,肾素-血管紧张素转换酶抑制剂(angiotension converting enzyme inhibitors,ACEI)除被广泛应用于高血压治疗外,还能抑制部分肿瘤细胞的生长。近期研究发现,白藜芦醇具有ACEI舌性,提示除了对肿瘤细胞增殖、凋亡影响外,白藜芦醇可能具有不同于其他抗肿瘤药物的特性和机理。本实验初步探讨白藜芦醇对恶黑AngⅡ/AT1R表达的影响,进一步研究白藜芦醇是否通过对AngⅡ/AT1R的调控抑制恶黑血管新生,以期为白藜芦醇对恶黑的抗癌效应找到新的实验及理论依据。 方法:放免法检测白藜芦醇对人恶黑细胞株A375细胞培养上清液中AngⅡ的表达水平的影响,RT-PCR及Western印迹法检测白藜芦醇对A375细胞AT1R表达的影响。体外小管形成实验检测白藜芦醇对HUVEC体外小管形成的影响,Western印迹法检测白藜芦醇对A375细胞VEGF及环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。 结果:(1)100μmol/L白藜芦醇作用24h后,人恶黑细胞株A375细胞培养上清液中AngⅡ表达水平较对照组差异无统计学意义(P0.05);(2)100μmol/L白藜芦醇作用24h后,ATlR在A375细胞mRNA及蛋白水平的表达较对照组明显降低,差异有显著性(P0.05)。(3)白藜芦醇能明显抑制HUVEC管状结构的形成,100μmol/L白藜芦醇处理后,二维基质胶中HUVEC形成不完整的、松散的管状结构,小管的直径及面积均明显低于对照组(P0.05)。(4)白藜芦醇能明显下调A375细胞VEGF及COX-2的表达,且呈量效及时效关系。与对照组相比,25μmol/L白藜芦醇作用24h后,VEGF及COX-2的表达即呈现下调(P0.05),100μmol/L白藜芦醇作用24h后,则下调更为明显(P0.01);100μmol/L白藜芦醇作用6h后即可下调VEGF及COX-2的表达(P0.05),24h后更明显(P0.01)。 结论:白藜芦醇参与对MM局部RAS的调控。其调控机制不是通过其ACEI效应,而是通过抑制ATlR的表达来实现的。白藜芦醇能明显抑制血管生长因子VEGF及COX-2的表达并能明显抑制MM血管新生,提示白藜芦醇可能是通过对ATlR的下调进而影响恶黑的血管新生从而发挥其抗癌效应。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张?,胡君萍,韩玫,周勇;HPLC法测定花生不同部位中白藜芦醇的含量[J];新疆医科大学学报;2003年05期
2 刘德茂;史德胜;;HPLC法测定降酶片中白藜芦醇和虎杖苷[J];中草药;2009年09期
3 李岩;王东玉;;白藜芦醇抗脑缺血再灌注损伤的研究进展[J];广东医学;2010年17期
4 刘茅茅,王拥军,李小玲,梁宪红,梁德军;白藜芦醇对大鼠腔隙性脑梗死模型急性期的脑保护作用[J];郑州大学学报(医学版);2003年05期
5 唐传核,杨晓泉;葡萄及葡萄酒生理活性物质的研究概况(Ⅲ)——预防癌症、炎症、神经疾患及其它疾病效果[J];中国食品添加剂;2003年03期
6 周锦珂,李金华,葛发欢;超临界CO_2萃取虎杖中白藜芦醇的工艺研究[J];中药材;2004年09期
7 俞瑜,曾耀英,刘良,季煜华,肇静娴;白藜芦醇对活化小鼠T淋巴细胞IL-2和CD25表达的影响[J];中国免疫学杂志;2005年04期
8 刘宏胜;王金环;徐新女;王淑杰;祁建滨;卜国云;刘洪利;;RP-HPLC法测定花生仁、花生油和葡萄干中白藜芦醇[J];中草药;2006年08期
9 丁宇;范红;;天然植物活性成份白藜芦醇的抗炎作用研究进展[J];华西医学;2008年01期
10 严志强;孔翰;陈斯国;张鲁;沈宝荣;姜宗来;;白藜芦醇在低血流诱导血管重建中的作用与机制[J];医用生物力学;2009年S1期
11 汪冬庚,刘文英;大鼠一次性灌服虎杖提取物后白藜芦醇血浓度测定方法的研究[J];中国临床药理学与治疗学;2004年06期
12 赵娟,马会杰,董京辉,张利萍,刘华磊,王庆山;白藜芦醇对离体豚鼠乳头状肌的电生理效应(英文)[J];生理学报;2004年06期
13 许丹;朱明元;罗莉;周光宇;黄忆明;;白藜芦醇对衰老小鼠肝脏抗氧化能力影响[J];中国公共卫生;2006年04期
14 王尊元,马臻,李强,沈正荣;白藜芦醇的合成[J];中国医药工业杂志;2003年09期
15 ;葡萄酒防治癌症的主要成分——白藜芦醇[J];中国健康月刊;2006年11期
16 ;研究表明红酒提取物可对抗炎症[J];中国食品学报;2009年04期
17 李怡棠,钟淼,邓永江,朱秀媛,程桂芳;IV型变态反应中白细胞介素6的表达及白藜芦醇的抑制作用[J];药学学报;1999年03期
18 杨迎暴,朴英杰;白藜芦醇对急性脊髓损伤早期脂质过氧化反应和活性氧水平的抑制作用[J];中国临床药理学与治疗学;2002年03期
19 舒友琴,陈敏;白藜芦醇和白藜芦醇苷研究进展[J];郑州牧业工程高等专科学校学报;2003年04期
20 刘世清,梅红军,刘军,彭昊,明江华;白藜芦醇对大鼠脊髓损伤早期Bcl-2和Bax表达的影响[J];中国临床康复;2005年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈纯白;都霞;赵乐萍;王林;吴淑娟;潘建春;;白藜芦醇拮抗围绝经期抑郁模型小鼠的行为异常及机制研究[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
2 王光丽;周小辉;傅玉才;;白藜芦醇改善肝细胞脂肪变性的相关调节机制[A];第十八次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2009年
3 杨静玉;孟雪莲;陈国良;张丽佳;赵思奇;王笑笑;连国宁;吴春福;;白藜芦醇及其衍生物抑制小胶质细胞活化的作用研究[A];第十届全国抗炎免疫药理学学术会议论文集[C];2010年
4 都霞;陈玲;林蒙蒙;王林;潘建春;;白藜芦醇对围绝经期模型小鼠的抗抑郁及神经保护作用[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年
5 白斌;赵彦鼎;梁凉;李聪;申烨华;;高浓度琼脂糖凝胶微球分离纯化白藜芦醇[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年
6 王俊芳;刘春艳;吴本宏;范培格;段伟;李绍华;王利军;;利用UV-C辐射处理研究白藜芦醇在葡萄器官或组织中的积累和运输[A];中国园艺学会2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
7 吕秋军;温利青;陈振花;郭绍明;叶棋浓;任建平;;白藜芦醇的雌活性研究[A];中国药理学会毒理专业委员会第十次学术会议论文摘要汇编[C];2004年
8 贾德安;周玉杰;朱鹏立;阮景明;沈阳辉;俞兆希;;白藜芦醇对血管内皮细胞CD40途径的影响[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
9 陈明亮;张桂英;李吉;简丹;谢红付;陈翔;;白藜芦醇对UVA辐射皮肤成纤维细胞增殖及iNOS表达的影响[A];2009全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2009年
10 廖章萍;邹逢琳;尹淑华;汤蕾;刘丹;何明;;C1-参与白藜芦醇抗心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用的研究[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李东升;白藜芦醇对恶性黑素瘤抗癌机制的实验研究[D];华中科技大学;2011年
2 舒晓宏;白藜芦醇在原发性脑肿瘤中的代谢特点、活性形式、作用靶点及其与抗癌效果的关系[D];大连医科大学;2010年
3 彭晓琳;白藜芦醇数据库建立、深圳居民摄入量评估及生物效应、代谢学研究[D];华中科技大学;2011年
4 徐强;高糖诱导血管内皮功能障碍的分子机制及白藜芦醇的干预作用[D];第三军医大学;2010年
5 敦洁宁;5-氟尿嘧啶联合白藜芦醇的抗肿瘤作用研究[D];河北医科大学;2011年
6 翟吉良;白藜芦醇对兔激素性骨坏死预防作用的实验研究[D];北京协和医学院;2011年
7 温东海;白藜芦醇对糖尿病肾病的保护作用及其机制初探[D];复旦大学;2011年
8 张瑶;白藜芦醇对宫颈癌侵袭的影响及其分子机制的研究[D];中国医科大学;2010年
9 廖章萍;白藜芦醇抗心肌缺血再灌注损伤的线粒体机制研究[D];南昌大学;2011年
10 王春旭;巴西莓和白藜芦醇对高糖、高蛋白或高脂饮食果蝇寿命的影响及机制研究[D];华中科技大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 任俊伟;白藜芦醇对局灶脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用及机制研究[D];重庆医科大学;2011年
2 闻剑飞;补充白藜芦醇对小鼠运动性骨骼肌微损伤修复的影响[D];河北师范大学;2010年
3 王莉莉;大孔吸附树脂分离虎杖中白藜芦醇的研究[D];长安大学;2010年
4 孔晓霞;白藜芦醇对大鼠卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响及其相关调控机制研究[D];汕头大学;2010年
5 张瑞;白藜芦醇抗真菌作用及其机制研究[D];河北医科大学;2011年
6 贾美玲;浆果类水果生物活性成分分析[D];辽宁师范大学;2010年
7 张硕;白藜芦醇和木樨草素对小鼠乳腺癌的抗转移作用[D];河南大学;2010年
8 赵赛;白藜芦醇对2型糖尿病大鼠胰岛细胞保护作用及其机制的研究[D];河北医科大学;2011年
9 赵康;桑椹中白藜芦醇及其苷的含量和光稳定性研究及MaPAL基因的克隆分析[D];西南大学;2010年
10 郑舒静;转录因子FoxO1和白藜芦醇对胰岛β细胞生存的影响及机制探讨[D];福建医科大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘霞;新方法可分离出大量白藜芦醇[N];科技日报;2011年
2 王迪;白藜芦醇渐入补充剂行业法眼[N];医药经济报;2009年
3 邹永;风中把盏 笑谈白藜芦醇[N];医药经济报;2003年
4 张中桥;第四军医大学西京医院研究表明:白藜芦醇具有脑保护作用[N];中国医药报;2005年
5 张中桥;藜芦醇具有脑保护作用[N];中国中医药报;2006年
6 ;白藜芦醇的生物学作用研讨会在京举行[N];北京科技报;2002年
7 周为华;白藜芦醇有抗艾滋病病毒作用[N];中国医药报;2006年
8 记者 李志峰 通信员 柏昌云;国内最大白藜芦醇生产线黔江投产[N];重庆日报;2010年
9 徐铮奎;美国加快开发出新型“保健饮品”[N];中国医药报;2009年
10 吴一福 苏玉军;白藜芦醇可诱导胃癌细胞脱落凋亡[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978