收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

9-硝基喜树碱脂质体抗肝癌作用研究

郑顺贞  
【摘要】:时至今日,恶性肿瘤的治疗仍然是一个世界性的难题。除了手术治疗之外,化学药物治疗是肿瘤治疗最为重要的手段,然而毒副作用过大是目前化疗药物治疗肿瘤最大的障碍,过高的毒副作用迫使给药剂量降低,给药剂量的下降导致了药物的治疗效果下降。这个特点在细胞毒药物上反应的尤为明显,大多数细胞毒药物在体外非常有效,但在体内对肿瘤细胞和正常细胞表现为不加选择的杀伤,引起了包括恶心、呕吐、脱发、骨髓抑制和肾衰竭等一系列副作用,因此化疗药物的非特异性限制了药物的抗肿瘤效果。肿瘤化疗过程中,面临的一个难题是如何将足量有效的化疗药物传递到肿瘤组织周围的同时最大程度的降低药物在正常组织的分布,从而降低药物的毒副作用。 药物传递系统(Drug Delivery System, DDS)尤其是纳米药物传递系统(Nano Drug Delivery System, NDDS)的出现为化疗药物的给药提供了新的手段。NDDS作为肿瘤化疗药物的纳米载体,可以通过改变药物动力学和生物分布来改善传统化疗药物的药理学特性。 喜树碱(Camptothecin,CPT)是从中国特有的珙桐科植物喜树中提取的一种生物碱,二十世纪六十年代被发现具有良好的抗肿瘤作用。9-硝基喜树碱(9-nitrocamptothecin; 9NC)是CPT的衍生物,研究发现9NC具有极强的抗肿瘤效果,但是9NC不溶于水,口服后生物利用度低等原因阻碍了9NC的临床应用。更为重要的是9NC的内酯型结构是其发挥抗肿瘤作用的关键,而9NC单体在生理状态的弱碱性环境中极易转换为羟酸盐型结构,导致9NC抗肿瘤效果显著下降。 目的: 在本项研究中,我们利用脂质体作为纳米载体,构建了9-硝基喜树碱脂质体纳米药物(9-nitrocamptothecin loaded liposomes,9NC-LP)。我们通过观察9NC和9NC-LP在体外、体内对肝癌细胞株生长的抑制作用,研究在与脂质体结合前后9NC抗肿瘤效果的改变;通过观察9NC和9NC-LP在体外、体内对肝癌细胞周期和凋亡的影响初步探讨药物抗肿瘤的机制;通过观察9NC和9NC-LP经静脉给药后对肝癌裸鼠皮下移植瘤模型的抗肿瘤作用和对裸鼠体重、行为的影响,评估9NC-LP抗肿瘤效果和毒副作用,初步评价9NC-LP作为静脉用抗肿瘤药物的可能性。 方法: 1.试验中首先采用MTT法和BrdU法测定9NC和9NC-LP孵育不同时间后,肝癌细胞株HepG2、Bel-7402、Hep 3B、SMMC-7721和正常肝细胞株L02细胞活力及细胞增殖力改变。并利用SPSS 13.0计算药物的IC50,比较9NC和9NC-LP在各个时间点对细胞的抑制作用,并筛选下一步实验中使用的细胞株。 2.9NC和9NC-LP孵育细胞后,PI对细胞进行染色,利用流式细胞仪测定细胞周期改变和SubGl峰(凋亡峰);然后再用Annexin V-PE/7-AAD对细胞进行染色,流式细胞仪测定细胞的凋亡情况。 3.通过在裸鼠背部皮下注射HepG2细胞,建立肝癌的裸鼠皮下瘤移植模型,经尾静脉给药后定期测量裸鼠的肿瘤体积变化,计算肿瘤生长抑制率;定期观察裸鼠的体重和行为改变,评价药物的毒副作用。 4.在体外,9NC和9NC-LP孵育细胞后,提取细胞总蛋白,Western Blot测定细胞周期和凋亡蛋白表达变化;在体内,荷瘤鼠给药一段时间后处死裸鼠,切取肿瘤组织并提取蛋白,Western Blot测定细胞周期和凋亡蛋白表达变化。 结果: 1.9NC和9NC-LP在体外均可以抑制细胞生长,孵育24h后9NC和9NC-LP对细胞生长的抑制无明显差异,孵育48h和72h后9NC-LP对细胞生长的抑制强于9NC。9NC和9NC-LP对细胞生长的抑制呈现明显的时间和剂量依赖,细胞活力和细胞增殖力随着孵育时间延长和剂量增加逐渐下降;同时,药物对细胞生长的抑制呈现明显的细胞依赖性,抑制效果依次为HepG2 Bel-7402 SMMC-7721 L02 Hep3B。 2.9NC和9NC-LP孵育后细胞周期出现明显改变,孵育24h后S期阻滞最为明显,孵育72h后G2/M期细胞显著增多。Sub-G1峰和Annexin V-PE/7-AAD双染均提示9NC和9NC-LP孵育后细胞出现凋亡。药物孵育后细胞周期改变先于凋亡出现。9NC和9NC-LP对细胞周期和凋亡的调控呈现明显的细胞依赖性,调控效果依次为肝癌细胞正常肝细胞p53缺陷的肝癌细胞。 3.在体内,9NC和9NC-LP均表现出抑制肿瘤生长的作用,9NC-LP抗肿瘤效果强于9NC。9NC原料药在高、低剂量时均出现明显的体重下降和药物相关的裸鼠死亡;9NC-LP组裸鼠在高、低剂量时体重下降均明显弱于9NC组,且未出现药物相关裸鼠死亡。9NC高、低剂量组均引起动物死亡、腹泻、出血性膀胱炎等副作用,9NC-LP副作用较轻。 4.体外,药物孵育后HepG2、L02细胞周期蛋白和凋亡蛋白出现显著的表达变化,蛋白表达变化支持细胞S期阻滞和凋亡,蛋白表达变化HepG2L02,但p53缺陷的Hep3B细胞蛋白表达变化不明显。体内蛋白表达与体外一致,并呈现量效关系。 结论和创新点: 1.我们在国内首次采用卵磷脂材料构建用于9NC传递的脂质体纳米载药系统,同时将9NC的这种静脉用脂质体剂型进行了动物模型体内实验,并取得良好的效果。在体外、体内,与脂质体结合后9NC抗肿瘤效果增加,提示脂质体纳米载药系统可以提高9NC的抗肿瘤活性。9NC-LP对肿瘤的抑制呈现明显的时间和剂量依赖,提示9NC-LP符合化疗药物的药效学一般特征。我们的研究在国内开拓了9NC纳米载药系统新的研究领域,在国际上较为先进。 2.我们通过对9NC和9NC-LP体外、体内抗肿瘤机制的探讨,发现除了引起细胞周期阻滞之外,诱导凋亡也是9NC抗肿瘤的重要机制。进一步的研究显示死亡受体介导的凋亡和线粒体相关的凋亡都在9NC抗肿瘤过程中发挥了一定作用。此外,在p53缺陷的细胞中,9NC诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡的能力明显下降,提示p53在9NC抗肿瘤过程中发挥着重要作用。这些发现进一步完善了9NC抗肿瘤机制理论。 3.我们的研究显示,经静脉注射空白卵磷脂脂质体后动物耐受良好,在实验剂量下未发现毒副作用,提示脂质体载体本身对机体并无毒性。经静脉注射后,与9NC原料药相比9NC-LP抗肿瘤作用增强,同时毒副作用显著下降。毒副作用的下降使得动物对药物的可耐受剂量增高,从而提高了给药剂量,这进一步增强了药物的抗肿瘤效果。这些发现提示新构建的纳米载药系统9NC-LP经静脉用药抗肿瘤效果显著,可能改变目前9NC无静脉制剂的现状。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 沈洁;王青松;许向阳;周建平;;喜树碱类衍生物脂质体的研究进展[J];中国药科大学学报;2007年04期
2 黄毅,刘松青;喜树碱类药物的剂型研究[J];中国药业;2004年05期
3 高燕;王刚;;紫杉醇脂质体的研究进展[J];中国社区医师(医学专业半月刊);2009年17期
4 张尚锁;方芸;蒋俊毅;;喜树碱类药物雾化吸入给药治疗肺癌的研究进展[J];中国药房;2008年21期
5 王全兴,曹雪涛,章卫平,周正芳,马施华,叶天星;瘤体内注射脂质体包裹的IL-2基因的抗肿瘤作用及其局部免疫机理分析[J];中国免疫学杂志;1995年05期
6 张景勍,张志荣;紫杉醇靶向制剂的研究进展[J];中国药房;2001年07期
7 朱于村,李汉蕴;脂质体用作皮肤局部给药的载体[J];中国医药工业杂志;1998年05期
8 后桂荣,曾抗,周再高;脂质体在皮肤领域中的应用及其作用机制[J];皮肤病与性病;2003年04期
9 陈军,方芸;脂质体肺部给药的研究[J];药学进展;2003年02期
10 宫亮,杨和平;脂质体载药系统与抗肿瘤药物[J];中国药业;2005年03期
11 李志宇,何生,薛华,苏敏,汪现;葡萄球菌肠毒素A脂质体的制备及其体内分布试验[J];华西医科大学学报;2002年02期
12 育巍;;脂质体与单克隆抗体结合增强抗病毒药效[J];国外医学情报;1990年24期
13 关世侠,王东凯,张俊杰,顾学裘;环磷酰胺脂质体体内药物动力学研究[J];沈阳药科大学学报;1993年03期
14 柳益书,张建新,姚礼庆,沈锡中;磁性脂质体的研究现状[J];江苏大学学报(医学版);2005年01期
15 赵明芳;刘云鹏;朱志图;侯科佐;;人参多糖在复方氟脲嘧啶多相脂质体中的作用[J];中国医科大学学报;2005年06期
16 黄黎;李成文;;脂质体在医学中的应用进展[J];国际生物制品学杂志;2006年03期
17 刘扬;吕万良;张强;;脂质体及纳米粒药物递送系统的研究进展[J];中国医学科学院学报;2006年04期
18 张献清;吴道澄;;微囊化人工红细胞研究进展[J];现代检验医学杂志;2007年02期
19 余尧;刘伟平;高文桂;谌喜珠;刘洋;;铂类抗癌药物脂质体的研究进展[J];中国新药杂志;2007年10期
20 俞迪佳;;紫杉醇新剂型研究现状[J];齐鲁药事;2010年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张碧华;杜守颖;;脂质体应用研究及其在天然药物领域的探索[A];现代化中药制剂发展与中药药理学研究交流会论文集[C];2009年
2 车晓平;赵小伟;李卫敏;;脂质体在皮肤局部给药系统中的应用[A];2007中药药物创新与制药关键技术研讨会暨中华中医药学会中药化学中药制剂学术会议论文集[C];2007年
3 高华;薛红利;黄学娣;陈俐娟;孟文彤;阚兵;王先和;牛挺;;脂质体和厚朴酚治疗淋巴瘤的实验研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
4 徐昕;潘卫三;聂淑芳;祝林;奉建芳;;蟾毒提取物长循环脂质体的生物学评价[A];2009全国中药创新与研究论坛学术论文集[C];2009年
5 安身景;甘礼华;姚远;张付清;徐子颉;郝志显;陈龙武;;异丙酚与卵磷脂脂质体相互作用研究[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
6 赵大庆;高新风;裴奉奎;倪嘉缵;黄芬;;用NMR方法研究山莨菪碱与DPPC脂质体的相互作用[A];第七届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];1992年
7 吴心怡;;脂质体抗肿瘤应用研究进展[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
8 于波涛;张志荣;;肺靶向穿心莲内酯脂质体的研究[A];2008年成渝药学学术年会论文集[C];2008年
9 涂良钰;李绍珍;;抗代谢中药剂型及对晶体上皮细胞作用的研究[A];全国首届中青年中医眼科学术研讨会资料汇编[C];1996年
10 黄虹;龚永生;范小芳;毛孙忠;胡良冈;;脂质体L-精氨酸对慢性低氧高二氧化碳大鼠一氧化氮代谢及其合酶基因表达的影响[A];第六次全国缺氧和呼吸病理生理学术会议论文摘要汇编[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑顺贞;9-硝基喜树碱脂质体抗肝癌作用研究[D];华中科技大学;2011年
2 李斌生;载端粒酶ASODN-t的壳聚糖纳米粒的制备和对肝癌HepG-2细胞的转染[D];中南大学;2007年
3 刘屹;和厚朴酚脂质体治疗卵巢癌的实验研究[D];四川大学;2007年
4 周青峰;海藻糖的发酵制备和保护机理的研究[D];华南理工大学;1997年
5 冯力蕴;复合荧光CdSe量子点的制备、表征与光学性质研究[D];中国科学院研究生院(长春光学精密机械与物理研究所);2006年
6 戚凤春;新型流感疫苗的研究[D];吉林大学;2006年
7 康建功;鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分脂质体研制及抗肿瘤实验研究[D];中国海洋大学;2007年
8 于建斌;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对恶性黑素瘤生长抑制作用的实验研究[D];郑州大学;2007年
9 金涌;5-氟尿嘧啶半乳糖神经酰胺脂质体的制备及抗肝癌作用研究[D];安徽医科大学;2004年
10 解亦斌;胰腺癌肝转移脂质体阿霉素介入化疗实验研究[D];中国协和医科大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱莉;5-氟尿苷棕榈酸酯脂质体的制备及其细胞毒性研究[D];重庆医科大学;2008年
2 张立;hBAFF靶向载有长春新碱的脂质体杀伤淋巴瘤细胞Raji的实验研究[D];第三军医大学;2006年
3 史万贵;贝尼尔脂质体的安全性试验及对羊泰勒虫病的田间驱治实验[D];甘肃农业大学;2004年
4 韩智星;乳腺癌靶向药物的制备与效果研究[D];吉林大学;2009年
5 贡亦清;5-氟尿嘧啶脂质体防治增生性玻璃体视网膜病变的实验研究[D];安徽医科大学;2004年
6 王筱亮;重组水蛭素脂质体鼻腔给药的研究[D];北京中医药大学;2005年
7 赵海英;促肝细胞生长素前体脂质体的研究[D];沈阳药科大学;2001年
8 吕文平;脂质体转染胞嘧啶脱氨酶基因(CD/5-FC)联合放射线治疗人直肠癌的实验研究[D];第三军医大学;2002年
9 薛同春;单抗Au_(14-1)-脂质体-p53基因转染载体的制备及其在宫颈癌U_(14)细胞中的表达[D];江西医学院;2004年
10 赵占中;新孢子虫NcSRS2 DNA疫苗的研究[D];中国农业大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 章迪思;高难高精“药物小车”中国也能造[N];解放日报;2009年
2 ;中国脂质体研发路漫漫[N];中国医药报;2001年
3 白毅;沈阳药大脂质体研究成效突出[N];中国医药报;2005年
4 张亚红 朱照静;摸索新途径 提高靶向性[N];中国医药报;2006年
5 本报记者  白毅;靶向给药系统研究 风景这边正好[N];中国医药报;2006年
6 杨方;走出“中药无副作用”的误区[N];保定日报;2006年
7 记者 白毅;天麻多糖具有抗肝癌作用[N];中国医药报;2010年
8 江西农业大学 翟明仁 博士 教授;用安全的大局观抉择“取与舍”[N];中国畜牧兽医报;2007年
9 孙清廉;用药讲究先后顺序[N];健康时报;2006年
10 祝建材;用药:别让扭曲心理贻害健康[N];中国医药报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978