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siRNA靶向沉默HPA基因对人膀胱癌BIU-87细胞的生物学及HPA相关基因的影响

郭炬  
【摘要】:第一部分siRNA靶向沉默HPA基因对人膀胱癌BIU-87细胞的生物学及HPA相关基因的影响 实验一 HPA-siRNA序列设计合成和其对膀胱癌BIU-87细胞靶基因的沉默效应检测 目的:设计合成针对人肝素酶基因(HPA)的小干扰RNA(siRNA)序列,并检测其对人膀胱癌BIU-87细胞靶基因的沉默效应。 方法:针对人肝素酶基因mRNA序列件设计并化学方法合成4对肝素酶siRNA及1对阴性对照序列,采用脂质体2000将其转染人膀胱癌BIU-87细胞,RT-PCR、Real-time q-PC检测细胞HPAmRNA, Western blot检测细胞HPA蛋白表达,并筛选出最有效的siRNA序列。 结果:四对siRNA均能不同程度沉默HPA基因的表达,以针对1496-1514bp靶点的HPA-siH4干扰效果最好,PCR和Western blot结果示能有效降低BIU-87细胞HPA mRNA (P0.05)和蛋白(P0.05)的表达水平。 结论:成功设计和合成了沉默人肝素酶基因的小干扰RNA序列,有效地降低了BIU-87细胞mRNA和蛋白的表达,为进一步研究奠定了基础。 实验二 siRNA靶向沉默HPA基因后对VEGF、MMP-9基因和人膀胱癌BIU-87细胞生物学的影响 目的:观察小干扰RNA沉默HPA基因对人膀胱癌BIU-87细胞生物学及基因血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。 方法:用脂质体2000将前期研究筛选的HPA-siH4转染至人膀胱癌BIU-87细胞株内,PCR、蛋白免疫印迹法分别检测HPA两种相关基因VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平;细胞克隆形成实验,Transwell,小管形成实验分别检测干扰后BIU-87细胞增殖、侵袭、肿瘤血管生成能力。 结果:HPA-siH4沉默靶基因后能有效降低BIU-87细胞VEGF (P0.05)和MMP-9(P0.01)两种基因mRNA和蛋白的表达水平;与对照组对比,干扰后BIU-87细胞增殖能力(P0.05)、侵袭能力(P0.01)和成血管作用(P0.01)均有下降。 结论:靶向HPA的siRNA有效沉默人膀胱癌BIU-87细胞HPA基因,并下调了与肿瘤进展密切相关的VEGF和MMP-9,能明显抑制BIU-87细胞恶性生物学行为。 第二部分腹腔镜隐睾下降固定术与开放隐睾下降固术治疗NPT疗效的meta分析 目的:采用Meta分析的方法来研究对比腹腔镜下隐睾下降固定术和传统开放手术治疗NPT的临床效果,为临床治疗NPT术式的选择提供依据。 方法:从Medline、Embase、Ovid、Web of Science以及Cochrane数据库检索2010年8月以前的腹腔镜下隐睾下降固定术(Laparoscopic orchiopexy, LO)与开放隐睾下降固定术(Open orchiopexy,00)进行随机对照研究(RCTs)或临床对照研究(OCSs)的相关文献,并将其整理进行Meta分析。 结果:在搜索到的226个相关文献中,两个随机对照研究及五个临床对比研究文献被纳入,其中包括了173例行LO术及261例行OO术的病例。结果显示,行LO术的病例住院时间与行OO术的病例相比显著缩短(加权均数差(WMD)=-0.66;95%CI=-0.95~-0.37)。然而两者在手术时间(WMD=4.02;95% CI=-9.89~17.93;P=0.57)、术后恢复进食(WMD=-2.29;95% CI=-6.78~2.20;P=0.32)或术后恢复完全活动时间(WMD=-9.71;95% CI=-27.84~8.42;P=0.29)、复发率(优势比(OR)=0.60;95%可信区间(CI)=0.13~2.72;P=0.51)、睾丸存活率(OR=1.61;95% CI=0.30~8.52;P=0.58)、手术成功率(OR=1.41;95% CI=0.44~4.46;P=0.56)、睾丸萎缩(OR=1.70;95% CI=0.49~5.98;P=0.40).无明显统计学差异。 结论:虽然LO术式在缩短住院时间上有优势,但是它在治疗NPT方面与OO术式相比没有明显优越性。然而由于发表偏倚(publish bias),还需要更多的随机对照试验研究来探讨LO术治疗NPT患儿的效果。


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